電針對大鼠腦缺血再灌注損傷腦組織sod、mda代

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1、電針對大鼠腦缺血再灌注損傷腦組織SOD、MDA代【摘要】目的觀察電針對大鼠缺血再灌注損傷腦組織超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)含量的影響。方法54只成年SD雄性大鼠按完全隨機法分為正常組,假手術組每組各12只,模型組、電針組每組各15只。采用線栓法復制局灶性腦缺血大鼠模型,于腦缺血再灌注3h、15h、27h動態(tài)觀察各組腦缺血大鼠再灌注損傷腦組織SOD活性和MDA含量。結(jié)果各造模組大鼠血漿SOD活性比正常組均有所降低,模型組與各組比較有顯著性差異(P<0.05);各造模組大鼠血漿MDA的含量比正常組均有所升高

2、,模型組與各組比較有顯著性差異(P<0.01);電針組與正常組比較有顯著性差異(P<0.05)。結(jié)論電針在某種程度上能夠抑制自由基的產(chǎn)生及連鎖反應的發(fā)生,提高SOD活性,降低MDA的含量,從而起到清除氧自由基、減輕再灌注損傷、保護腦細胞的作用?!娟P鍵詞】電針 大鼠缺血再灌注 SOD MDA在缺血再灌注過程中,鈣離子超載,氧自由基的大量形成和脂質(zhì)過氧化的增加是加重腦細胞損傷的主要病理過程,鈣離子超載與氧自由基的生成和釋放密切相關,兩者相互促進。超氧化物歧化酶(superoxidedismutase,SOD)是生物

3、體內(nèi)主要的超氧自由基清除劑,丙二醛(malonyl-diadehyde,MDA)是脂質(zhì)過氧化反應的最終產(chǎn)物。腦缺血后脂質(zhì)過氧化反應活躍,MDA產(chǎn)生增多,SOD則因消耗增多而減少。[1]文獻曾報道,電針對家兔心肌缺血再灌注損傷心功能具有保護作用,[2]本實驗通過觀察電針療法對大鼠缺血再灌注缺血的側(cè)腦組織中超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)含量的影響,以探討電針對腦組織缺血再灌注損傷的保護作用,現(xiàn)將實驗方法及結(jié)果報道如下。1材料1.1實驗動物:選用成年SD大鼠54只,雄性,體重350±40克。清潔級,由上海中醫(yī)藥大

4、學實驗動物中心提供。1.2主要實驗儀器及設備:G-6805-H電針治療儀(上海金山匯豐電子器材廠制造),MDC-500型半導體激光治療儀(上海曼迪森科貿(mào)有限公司),722-光柵分光光度儀(上海精密科學儀器有限公司),HITAO-HI冷凍離心機(Hitachikokicoled),F(xiàn)J-200高速分散勻質(zhì)機(上海標本模型機廠),XDA試劑盒,購自南京建成生物工程研究所2方法2.1動物分組:動物常規(guī)飼養(yǎng)1周后,采用完全隨機法分為4組,即正常組、假手術組、模型組、電針組。正常組,假手術組每組各12只,模型組、電針組每組各15只。

5、2.2模型制備:(1)線栓制備:取進口4-0號單股尼龍線3.0cm,一端加熱使之成為光滑的圓球形,圓球直徑0.244-0.249mm,生理鹽水沖洗,置于1%的肝素鈉溶液,備用。(2)模型制備:參照Zea-longa的方法制備大鼠大腦中動脈缺血/再灌注模型(MCAO),在原方法的基礎上有所改進。缺血1.5h后再次麻醉,拔出栓線,使缺血區(qū)血流再灌。(3)步驟:①麻醉:10%的水合氯醛(0.3ml/100g)腹腔注射麻醉。②固定:仰臥手術臺,充分暴露大鼠頸部皮膚。③手術:頸部正中切口,從兩側(cè)頜下腺之間剪開淺筋膜,游離甲狀腺右葉,

6、顯露右側(cè)胸鎖乳突肌,鈍性分離胸鎖乳突肌與胸骨舌骨肌間的肌間隙,分離右側(cè)頸總動脈(CCA),頸外動脈(ECA),頸內(nèi)動脈(ICA),用電凝器電凝ECA的分支,游離ECA主干一段,在ECA深面穿二條細線,近心端打一活結(jié),并推向ECA根部,遠心端結(jié)扎ECA,沿ICA向下分離翼額動脈(PPA)。用小動脈夾夾閉CCA、ICA,在ECA游離主干段兩線結(jié)之間用弧形剪剪斷,滴0.03ml濃度為2.4×106U/L的肝素鈉溶液,然后將制備好的栓線插入ECA,經(jīng)CCA分叉處通過ICA,入顱腦至大腦前動脈(ACA),深度為18.5±0.5mm,

7、再灌注時再次麻醉,拔出線栓即可。大腦中動脈栓塞后1.5h恢復血供,再灌注3h。2.3處理及治療方法:正常組、假手術組、模型組同樣抓取,不進行治療。電針組:選百會、內(nèi)關、環(huán)跳、足三里,G-6805-H電針儀,采用疏密波,頻率為4-20Hz,強度以引起穴位周圍組織輕微顫抖為度,在示波器監(jiān)視控制下的電流強度為3mA,每次治療25分鐘,栓線拔出后再灌注3h,開始第一次治療,12h治療1次,共治療3次。2.4取材與樣品基礎處理:治療完成24h后,斷頭取腦,冰浴環(huán)境下將大腦從視交叉后1.5mm處切開,取缺血側(cè)前半腦稱重,放入10mm×

8、150mm的玻璃試管中,按重量/體積1:10的比例加入生理鹽水,-20℃保存,標測時制成10%的腦勻漿。SOD活力、MDA分別采用黃嘌呤氧化酶發(fā)光法、硫代巴比妥酸(TBA)法,采用721可見分光光度計測定,用考馬斯亮藍測定蛋白含量。2.5統(tǒng)計學方法:應用SPSS10.0軟件對數(shù)據(jù)進行分析處理,計量數(shù)據(jù)以

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