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《溫腎健脾方對(duì)大鼠慢性創(chuàng)面愈合的影響》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線(xiàn)閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫(kù)。
1、溫腎健脾方對(duì)大鼠慢性創(chuàng)面愈合的影響：曹永清，何春梅，陸金根【關(guān)鍵詞】創(chuàng)面愈合［摘要］目的：探討溫腎健脾中藥對(duì)慢性創(chuàng)面愈合的影響及可能作用機(jī)制。方法：采用大鼠背部開(kāi)放性創(chuàng)面模型，用肌注氫化可的松的方法造成慢性難愈性創(chuàng)面，以辛葡康為陽(yáng)性對(duì)照藥，應(yīng)用免疫組化、流式細(xì)胞術(shù)等方法，觀察創(chuàng)面愈合時(shí)間、新生上皮寬度、肉芽組織形態(tài)學(xué)變化、肉芽組織細(xì)胞周期、表皮生長(zhǎng)因子(epidermalgroinggrom，較模型組及空白組明顯增寬（P<0.05）；治療組新生毛細(xì)血管豐富，成纖維細(xì)胞數(shù)量多，而對(duì)照組、模型組及空白組新生毛細(xì)血管及成纖維細(xì)胞數(shù)量均較治療組明顯減少（P
2、<0.05）；治療組S期細(xì)胞比例較對(duì)照組、模型組及空白組明顯提高（P<0.05）；治療組及對(duì)照組與模型組及空白組比較，EGF、TGFβ1、FN蛋白表達(dá)均增強(qiáng)（P<0.05）。結(jié)論：溫腎健脾方有促進(jìn)大鼠慢性難愈創(chuàng)面修復(fù)的作用，其機(jī)制與調(diào)節(jié)細(xì)胞周期，上調(diào)EGF、TGFβ1細(xì)胞因子蛋白表達(dá)水平，促進(jìn)間質(zhì)FN的表達(dá)有關(guān)。［關(guān)鍵詞］中藥療法;創(chuàng)面愈合;肉芽組織;組織學(xué)比較;細(xì)胞因子Effectsofethods:NiysixSDratslydividedinto4groups,adeintherats.Forratsin3ofthe4groups
3、,hydrocortisoneinjectioninisteredtoinducechroniceandtheisorphologicalchangesandcellcycleofthegranulationtissue,andtheproteinexpressionsofepidermalgroinggromunohistochemicaltechniqueandfloetry.Results:Theeofthe;l的中藥水煎濃縮液，備用。辛葡康沖劑由杭康生物藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，批號(hào)20010211。1.1.3實(shí)驗(yàn)試劑與儀器氫化可的松琥珀酸鈉，50mg/
4、支，天津市生物化學(xué)制藥廠生產(chǎn)，批號(hào)20010419；表皮生長(zhǎng)因子(epidermalgroinggropus公司產(chǎn)品；流式細(xì)胞儀，美國(guó)BectonDickson公司產(chǎn)品。1.2造模方法參照傅小兵等［1］全層皮膚缺損法制成動(dòng)物體表潰瘍模型。SD大鼠常規(guī)飼養(yǎng)1周后，腹腔注射鹽酸氯胺酮150mg/kg，麻醉后造模區(qū)（腰椎正中偏上）剪毛，用直徑20mm塑料瓶蓋在造模區(qū)標(biāo)記造模面積，新潔而滅酊棉球皮膚消毒，沿標(biāo)記線(xiàn)剪去皮下組織至肌筋膜，止血，消毒紗布敷料覆蓋傷口，分籠單獨(dú)飼養(yǎng)，自由進(jìn)食飲水。次日起，模型組、治療組及對(duì)照組均肌注氫化可的松琥珀酸鈉100mg/kg，隔
5、日1次，共注射7次。1.3動(dòng)物分組及給藥1.3.1動(dòng)物分組采用完全隨機(jī)方法分組。每組24只大鼠，共分四組，即溫腎健脾方實(shí)驗(yàn)組（以下簡(jiǎn)稱(chēng)治療組）、辛葡康陽(yáng)性對(duì)照組（簡(jiǎn)稱(chēng)對(duì)照組）、模型組，以上3組背部造成創(chuàng)面后，均肌注氫化可的松琥珀酸鈉；空白組(正常創(chuàng)面組)，造模后不作處理。1.3.2給藥及取材給藥劑量按《中藥藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)》［2］中人鼠等效劑量換算，治療組自造模次日起以溫腎健脾方中藥水煎劑灌胃，2ml/次，1次/d；對(duì)照組以0.1g/ml辛葡康沖劑灌胃，2ml/次，1次/d；模型組及空白組均以等量生理鹽水灌胃。各組均分兩次取材。灌胃至第7天，每組各取8只動(dòng)
6、物處死后，取創(chuàng)面修復(fù)組織（主要是新生肉芽組織），一分為二，分別放置于新鮮生理鹽水及10%中性甲醛固定液中，一部分做細(xì)胞周期測(cè)定，另一部分用于形態(tài)學(xué)觀察及免疫組化法檢測(cè)肉芽組織中EGF、TGFβ1表達(dá)。灌胃至第14天，取8只動(dòng)物處死，測(cè)量新生上皮寬度，并取創(chuàng)面肉芽組織，10%中性甲醛固定，免疫組化法檢測(cè)肉芽組織中FN的表達(dá)。其余8只繼續(xù)灌胃至創(chuàng)面愈合。1.4觀察指標(biāo)與方法1.4.1創(chuàng)面愈合時(shí)間造模之日起至創(chuàng)面愈合所需的時(shí)間。1.4.2新生上皮寬度灌胃14d后，測(cè)量各組新生上皮的寬度。沿創(chuàng)緣前后及創(chuàng)緣左右各取4點(diǎn)（每點(diǎn)相對(duì)于創(chuàng)面中點(diǎn)的連線(xiàn)各成90o），用游標(biāo)
7、卡尺測(cè)量各點(diǎn)新生上皮的寬度，取平均值。1.4.3形態(tài)學(xué)觀察造模后第8天創(chuàng)面中央肉芽組織取材，生理鹽水沖凈血污，10%中性甲醛固定，石蠟包埋，切片厚約5mm，常規(guī)HE染色，光學(xué)顯微鏡觀察每高倍（10×40）視野下各組肉芽組織毛細(xì)血管（完整管腔）、纖維母細(xì)胞數(shù)及壞死程度，并用計(jì)分法表示，計(jì)分標(biāo)準(zhǔn)如下。毛細(xì)血管：無(wú)，計(jì)0分；1~5個(gè)，計(jì)1分；6~10個(gè)，計(jì)2分；>10個(gè)，計(jì)3分。纖維母細(xì)胞：無(wú)，計(jì)0分；1~30個(gè)，計(jì)1分；31~50個(gè)，計(jì)2分；>50個(gè)，計(jì)3分。壞死程度：無(wú)壞死，計(jì)0分；壞死少，計(jì)1分；壞死較多，計(jì)2分；壞死多，計(jì)3分。1.4.4肉
8、芽組織細(xì)胞周期測(cè)定造模后第8天創(chuàng)面中央肉芽組織取材，新鮮組織置于生理鹽水中，樣品
