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《反義雷帕霉素靶蛋白基因局部轉(zhuǎn)染對(duì)移植靜脈內(nèi)膜增生的影響》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在工程資料-天天文庫(kù)。
1、反義雷帕霉素靶蛋白基因局部轉(zhuǎn)染對(duì)移植靜脈內(nèi)膜增生的影響作者：胡新華張強(qiáng)楊軍劉程偉張志深楊德華【摘要】目的：觀察以納米粒子為載體的反義雷帕霉素靶蛋白（mTOR）基因局部轉(zhuǎn)染對(duì)移植靜脈內(nèi)膜增生的影響。方法：應(yīng)用聚乳酸聚乙醇酸共聚物（PLGA）和聚乙烯醇（PVA）包載mTOR基因，制備納米級(jí)粒子混合物。檢測(cè)其包埋率、體外釋放情況及粒子大小。建立自體靜脈移植模型，隨機(jī)分成轉(zhuǎn)基因組、空載體組、對(duì)照組。轉(zhuǎn)基因組移植靜脈轉(zhuǎn)染以納米粒子為載體的反義mTOR基因，空載體組單純轉(zhuǎn)染納米粒子包載的空載體，對(duì)照組不予特殊處理。分別于術(shù)后3d、7d、14d、28d取材，常規(guī)HE、Verhoeff染色，RT
2、PCR、C）凋亡的動(dòng)態(tài)變化。結(jié)果：轉(zhuǎn)基因組內(nèi)膜中mTOR基因的mRNA及蛋白產(chǎn)物表達(dá)較其他兩組明顯減少（P＜0.05）；轉(zhuǎn)基因組內(nèi)膜增生厚度7d、14d、28d較其他組明顯減少（P＜0.01）；轉(zhuǎn)基因組凋亡細(xì)胞較其他組明顯增高（P＜0.05）。結(jié)論：納米粒子可以作為轉(zhuǎn)基因載體，反義mTOR基因的表達(dá)能夠有效抑制自體移植靜脈內(nèi)膜的增生，促進(jìn)VSMC的凋亡?！娟P(guān)鍵詞】雷帕霉素靶蛋白・基因轉(zhuǎn)移，水平・內(nèi)皮，血管・靜脈・移植，自體・納米粒子【ABSTRACT】Objective:Tostudytheeffectofan
3、tisensemammaliantargetofrapamycin(mTOR)genetransfectionmediatedbynanoparticles(NP)onneointimalformationinratvEingrafts.Methods:NanoparticleantisensemTORgeneplexined.AutogenousvEIngraftmodelTORgroup:antisensemTORgenemediatedbyNPosis.(2)Emptyvectorgroup:theveinptyvectormediatedbyNP.(3)Controlgr
4、oup(notransfection).ThegraftedveinsTORmRNAandproteinexpressioninedbyRTPCRand光度計(jì)，Innova304氬離子激光器（美國(guó)Coherent公司）于25±0.1℃，進(jìn)行激光光散射的測(cè)定。納米粒子表面形態(tài)的觀察：將包裝了pEGPClmTOR質(zhì)粒DNA的納米粒子溶于蒸餾水中，滴加于蓋玻片上，自然干燥，噴金掃描。1.4載基因納米粒子體外釋放試驗(yàn)稱量含pEGPClmTOR質(zhì)粒DNA的納米粒子15.5mg,加入TE溶液中制成均一的懸浮液，將其放入雙室擴(kuò)散池的一側(cè)，兩池之間用0.22的濾膜隔開(kāi)，另一側(cè)為接收池，存放等體積
5、新鮮的TE釋放液，將此雙室擴(kuò)散池置于37℃130min的恒溫?fù)u床中進(jìn)行釋放實(shí)驗(yàn)，每24h用新鮮緩沖液更換接收池中的釋放液，更換出的樣品直接用紫外分光光度計(jì)在波長(zhǎng)260nm處測(cè)定吸光值，計(jì)算出釋放量繪制累積釋放曲線。1.5實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組及局部基因定位轉(zhuǎn)染72只大鼠，隨機(jī)分成轉(zhuǎn)基因組、空載體組、對(duì)照組。轉(zhuǎn)基因組：移植靜脈轉(zhuǎn)染以納米粒子為載體的pEGPClmTOR質(zhì)粒。空載體組：轉(zhuǎn)染納米粒子包載的pEGPCl空質(zhì)粒載體。對(duì)照組：不予特殊處理。每組24只，分別于術(shù)后3d、7d、14d、28d取材。建立大鼠自體靜脈移植模型：應(yīng)用顯微外科技術(shù)，取頸總靜脈內(nèi)側(cè)支5mm，轉(zhuǎn)基因組將移植靜脈段置于已
6、準(zhǔn)備好的DNA溶液（稱量DNA納米粒子6mg，加入生理鹽水0.3ml，制成均一的懸浮液）中30min后取出靜脈，切斷同側(cè)頸總動(dòng)脈，應(yīng)用110無(wú)創(chuàng)縫合線將靜脈段端端吻合于同側(cè)頸總動(dòng)脈；空載體組使用納米粒子包載的pEGPCl空質(zhì)粒；對(duì)照組使用生理鹽水。各組動(dòng)物分別于規(guī)定時(shí)間切取移植靜脈段，液氮中凍存。1.6形態(tài)學(xué)研究參照2結(jié)果2.1納米粒子粒度的測(cè)定光散射粒度分布圖可以看出，制備的載pEGPClmTOR質(zhì)粒DNA納米粒子的粒度集中分布在243~343nm，平均粒度為288.9nm。粒徑呈窄分布，粒徑大小穩(wěn)定可靠，包封效率為60%，用紫外分光光度計(jì)測(cè)得DNA含量為3%。粒子的體外釋放開(kāi)
7、始階段存在爆破釋放，約1周后釋放量開(kāi)始穩(wěn)定，釋放曲線緩慢上升，平穩(wěn)維持釋放18d以上（圖1）。納米粒子掃描電鏡測(cè)定：電鏡掃描觀察載反義mTOR的納米粒子，其直徑在300nm左右。2.2局部基因轉(zhuǎn)染結(jié)果靜脈移植1~2周，熒光顯微鏡下可見(jiàn)有較多轉(zhuǎn)染基因表達(dá)，分布于移植靜脈中層及內(nèi)膜，見(jiàn)圖2；移植4周，轉(zhuǎn)染基因表達(dá)減少。圖2熒光顯微鏡下觀察移植血管轉(zhuǎn)染基因的表達(dá)（略）2.3形態(tài)學(xué)研究結(jié)果各組均可見(jiàn)移植靜脈內(nèi)膜增厚,以14~28d最為明顯。術(shù)后3d，對(duì)照組及空載體組的內(nèi)膜增生厚度與轉(zhuǎn)基因
