經(jīng)帶寧膠囊含量測(cè)定方法的改進(jìn)

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1、經(jīng)帶寧膠囊含量測(cè)定方法的改進(jìn)【關(guān)鍵詞】囊含　　摘要：目的改進(jìn)經(jīng)帶寧膠囊含量測(cè)定的方法。方法在原高效液相色譜(HPLC)法的基礎(chǔ)上，采用流動(dòng)相溶解對(duì)照品和提取樣品以及提取方法的改變，并與原方法進(jìn)行比較。結(jié)果采用20μl定量環(huán)進(jìn)樣，色譜峰峰形好，減少進(jìn)樣誤差，使積分更準(zhǔn)確，并且降低檢驗(yàn)成本。結(jié)論改進(jìn)后的方法操作簡(jiǎn)單，重現(xiàn)性好，測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確可靠，更有利于產(chǎn)品質(zhì)量的控制?！　￡P(guān)鍵詞：經(jīng)帶寧膠囊；巖白菜素；高效液相色譜　　經(jīng)帶寧膠囊為苗族藥，現(xiàn)已收載于《國(guó)家中成藥標(biāo)準(zhǔn)匯編中成藥地方標(biāo)準(zhǔn)上升國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)部分》（外科、婦科分冊(cè)）里，其所含的巖白菜素采用RPHPLC法進(jìn)行測(cè)定。筆者

2、在測(cè)定該藥含量時(shí)發(fā)現(xiàn)重現(xiàn)性小，且對(duì)色譜柱污染極大，故對(duì)此進(jìn)行改進(jìn)。通過(guò)實(shí)驗(yàn)，改用流動(dòng)相稀釋對(duì)照品、提取供試品且用20μl定量環(huán)進(jìn)樣，結(jié)果準(zhǔn)確可靠，重現(xiàn)性好。現(xiàn)報(bào)道如下?！　?儀器與試劑　　美國(guó)ETTLERTOLEDO），臺(tái)式離心機(jī)（上海手術(shù)器械廠）。經(jīng)帶寧膠囊由貴州世禧制藥廠提供，巖白菜素對(duì)照品（批號(hào)：1532200001）由中國(guó)藥品生物制品檢定所提供；甲醇為色譜純，水為純凈水（經(jīng)減壓過(guò)濾脫氣）?！　?實(shí)驗(yàn)方法和結(jié)果　　2.1色譜條件［1］原方法實(shí)驗(yàn)條件不變。流動(dòng)相：甲醇水（25∶75），流速1.0ml・min1，檢測(cè)波長(zhǎng)275nm，柱溫：室溫。　

3、　2.2　對(duì)照品溶液的制備精密稱取巖白菜素對(duì)照品①0.01013g，②0.01006g，分別置100ml的容量瓶中，分別向①②兩份對(duì)照品里加入流動(dòng)相和甲醇使溶解，并稀釋至刻度，即得對(duì)照品溶液①②?！　?.3供試品溶液的制備精密稱取供試品分A，B，C，D四組，每組4份，每份約1g，分別置具塞三腳燒瓶中，精密加甲醇（A，B）和流動(dòng)相(C，D)各25ml，稱定重量。A，C超聲2min，取出放冷，稱定重量，分別用相應(yīng)溶劑補(bǔ)足減失的重量，搖勻，用0.45μm的微孔濾膜過(guò)濾，即得；B，D超聲30min，取出，放置過(guò)夜，稱定重量，分別用相應(yīng)溶劑補(bǔ)足減失的重量，離心3000r/

4、min，取上清液，用0.45μm的微孔濾膜過(guò)濾，即得。　　2.4對(duì)照品溶劑的考察分別精密吸取對(duì)照品溶液①②各5，10，20μl注入液相色譜儀。記錄得色譜圖，見(jiàn)圖1～2?！　纳V圖可知：用流動(dòng)相比用純甲醇溶解對(duì)照品的色譜圖更理想，定量更準(zhǔn)確。同時(shí)其它色譜條件不便，改用不同的色譜柱也得到以上相同的結(jié)論。說(shuō)明用流動(dòng)相甲醇-水（25∶75）做溶媒比用純甲醇做溶媒更理想?！　?.5線性關(guān)系的考察　　稱取巖白菜素對(duì)照品適量，加流動(dòng)相定量稀釋得巖白菜素對(duì)照品濃度為：25，50，100，200，400μg・ml1系列濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液，分別精密吸取以上標(biāo)準(zhǔn)溶液各20μ

5、l注入液相色譜儀分析，測(cè)定峰面積，以峰面積為縱坐標(biāo)（Y），濃度為橫坐標(biāo)（X）作線性回歸，得回歸方程Y=28432X+7249（r=0.9998）?！　?.6供試品前處理方法的考察　　分別測(cè)定2.3項(xiàng)下的供試品溶液A，B，C，D測(cè)定。結(jié)果見(jiàn)表1。表1不同處理方法處理后的含量測(cè)定結(jié)果　　　從以上數(shù)據(jù)可看出用流動(dòng)相做溶媒與用純甲醇做溶媒提取，巖白菜素含量無(wú)明顯差別，但是超聲30min后放置過(guò)夜比只超聲2h的巖白菜素含量稍高，因此采用流動(dòng)相做溶媒,超聲30min,靜置過(guò)夜的方法不論是從定量的準(zhǔn)確性，還是從成本節(jié)約上考慮，均比其它方法較優(yōu)越。供試品溶液的制備方法采用“取裝

6、量差異下的內(nèi)容物，研細(xì)，取1g，精密稱定，精密加流動(dòng)相25ml，稱定重量，超聲30min，取出，放置過(guò)夜，稱定重量，用流動(dòng)相補(bǔ)足減失的重量，搖勻，離心（3000r/min），取上清液，用0.45μm的微孔濾膜過(guò)濾，即得”。　　2.7精密度和重復(fù)性實(shí)驗(yàn)　　精密吸取取線性關(guān)系考察項(xiàng)下的0.1mg・ml1的對(duì)照品溶液20μl注入液相色譜儀重復(fù)測(cè)定，巖白菜素含量的相對(duì)偏差為RSD=0.7%（n=6）。對(duì)同一樣品重復(fù)進(jìn)樣20μl測(cè)定，巖白菜素含量的相對(duì)偏差為RSD=0.9%（n=6）?！　?.8回收率實(shí)驗(yàn)　　采用加樣回收法，稱取已知含量的經(jīng)帶寧膠囊供試品，加

7、入巖白菜素對(duì)照品，照2.6項(xiàng)下確定的供試品制備方法制備，HPLC法測(cè)定。結(jié)果見(jiàn)表2。表2　加樣回收率結(jié)果（略）　　2.9穩(wěn)定性取含量測(cè)定項(xiàng)的樣品液，隔1.5h進(jìn)樣測(cè)定，連續(xù)考察9h，結(jié)果樣品液9h內(nèi)穩(wěn)定，RSD=1.3%（n=7）?！　?.10樣品含量測(cè)定樣品含量測(cè)定。結(jié)果見(jiàn)表3。表3　樣品含量結(jié)果（略）　　3討論　　經(jīng)帶寧膠囊采用原方法測(cè)定含量時(shí)發(fā)現(xiàn)，樣品對(duì)色譜柱污染較嚴(yán)重，一顆新的色譜柱最多對(duì)供試品溶液進(jìn)樣20次，且色譜柱柱效大大降低，并且每一次都比上一次有所降低，以至使定量的重復(fù)性很差；在對(duì)對(duì)照品進(jìn)行測(cè)定時(shí)發(fā)現(xiàn)柱效與進(jìn)樣體積有關(guān)，并且影響特別大；樣品超聲時(shí)

8、間太長(zhǎng)，不利于超聲波清洗