骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞輸注對(duì)再生障礙性貧血模型小鼠骨髓

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1、骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞輸注對(duì)再生障礙性貧血模型小鼠骨髓【摘要】本研究探討人源骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（MSC）輸注對(duì)免疫介導(dǎo)性再生障礙性貧血模型小鼠骨髓造血功能及生存率的影響.采用雌性BALB/c小鼠30只，參照姚軍等方法建立免疫介導(dǎo)性再生障礙性貧血模型，實(shí)驗(yàn)分模型組、MSC組及照射組。MSC組于制模后3天從小鼠尾靜脈1次性輸注人骨髓MSC1×106，觀察各組小鼠外周血象變化、第28天存活率、骨髓有核細(xì)胞數(shù)量、造血集落生成和骨髓病理學(xué)特征。結(jié)果顯示：于制模后第7天，模型組外周血SC組和照射組，分別為（0.65±0.05）×109/L，（2.45±0.71）×109/L，（2.30±0.33）

2、×109/L；第10天3組均表現(xiàn)為全血細(xì)胞減少，第14天模型組血象指標(biāo)仍持續(xù)降低，而MSC組及照射組血象指標(biāo)開始回升，至28天3組小鼠存活率分別為18.2%、80%和100%，MSC組小鼠存活率顯著高于模型組（p<0.01）。MSC組小鼠單側(cè)股骨有核細(xì)胞數(shù)量、造血祖細(xì)胞集落生成數(shù)量均顯著高于模型組，而與照射組結(jié)果一致。結(jié)論：MSC輸注可減輕再生障礙性貧血模型小鼠骨髓造血衰竭程度，提高存活率。【關(guān)鍵詞】再生障礙性貧血EffectofBoneMarroalStemCellInfusiononHematopoiesisinMiceiaAbstractToexplorethee

3、ffectsofinfusionanmesenchymalstemcellsfrombonemarroarroatopoieticfunctionandsurvivalinmiceia(AA),immunomediatedaplasticanemiamicemodelethod.ThirtyBALB/cfemalemiceodelgroup,MSCgroupandradiationgroup.InMSCgroup,1×106MSCentofmodel.Thechangesofbloodcount，thenumberofnuclearcellsinasinglethighbo

4、ne,colonyformingunits(CFU),pathologicalfeaturesofbonemarroiceberofodelgroupatday7afterestablishmentofmodelodelgroupberofnucleatedcellsinsinglethighboneandpathologicalsliceasodelgroup,respectively.ThesurvivalrateofmiceinMSCgroupodel(18.2%,p<0.01).Therearroatopoiesisandsurvivalrate.Itiscon

5、cludedthatMSCinfusionreducesthedegreeofbonemarroprovesurvivalofimmunomediatedAAmicemodel.Keyia；animalmodel；mesenchymalstemcell；hematopoiesis骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（mesenchymalstemcells,MSC）除具有促進(jìn)造血干細(xì)胞移植后造血重建外，還具有免疫調(diào)節(jié)作用，防治移植物抗宿主病［1，2］。獲得性再生障礙性貧血主要是T淋巴細(xì)胞介導(dǎo)的骨髓造血功能衰竭［3，4］，且再生障礙性貧血患兒骨髓MSC體外增殖能力較正常對(duì)照兒童明顯減弱［5］。本研

6、究探討人源骨髓MSC對(duì)免疫介導(dǎo)性再生障礙性貧血小鼠骨髓造血功能及生存率的影響，再生障礙性貧血模型的建立清潔級(jí)雌性BALB/c小鼠（H2d、Mlsb），8-10周齡，16-18g，作為受者。清潔級(jí)DBA/2小鼠（H2d、Mlsa），6-10周齡，為淋巴細(xì)胞供者。兩者均由中山大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供。參照文獻(xiàn)［6］建立免疫介導(dǎo)性再生障礙性貧血模型。取DBA/2小鼠頸椎脫臼處死，常規(guī)消毒，無菌取出胸腺及頸部、頜下、腋窩、腹股溝、腸系膜等處淋巴結(jié)，分別獲胸腺、淋巴結(jié)細(xì)胞懸液,細(xì)胞濃度為5×106/ml，按胸腺細(xì)胞與淋巴結(jié)細(xì)胞以1∶2比例混合，即胸腺淋巴結(jié)細(xì)胞懸液。臺(tái)盼藍(lán)鑒定細(xì)胞活性，活

7、性細(xì)胞>95%。雌性BALB/c小鼠經(jīng)5Gy60Coγ射線全身照射（劑量率125.35cGy/min），照射后20小時(shí)內(nèi)由尾靜脈注入DBA/2小鼠胸腺淋巴結(jié)細(xì)胞1×106/只。小鼠照射后立即移入中山大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心SPF級(jí)無菌層流室內(nèi)，飲用加有慶大霉素（40萬U/L）和二性霉素B（50mg/L）高壓滅菌水，每日觀察并記錄小鼠體重、活動(dòng)力、外表、飲食、大便、死亡情況，制模后28天實(shí)驗(yàn)終止。MSC分離、擴(kuò)增及輸注取正常兒童骨髓2ml，按本室已建立的方法［7］進(jìn)行MSC分離、擴(kuò)增，傳代至4