白藜蘆醇抑制人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞生長(zhǎng)及誘導(dǎo)凋亡比較

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1、白藜蘆醇抑制人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞生長(zhǎng)及誘導(dǎo)凋亡比較作者：常洪波,章翔,甄海寧,費(fèi)舟,曹衛(wèi)東【摘要】目的探討白藜蘆醇（Resveratrol，Res）體外抑制U251、U87和SHG44腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞生長(zhǎng)及誘導(dǎo)凋亡的不同作用比較，驗(yàn)證Res確可導(dǎo)致U251細(xì)胞凋亡。方法MTT比色法測(cè)量不同劑量的Res作用U251、U87和SHG44膠質(zhì)瘤細(xì)胞24h后對(duì)增殖的影響及不同劑量的Res作用U251、U87和SHG44細(xì)胞6h、24h、48h后的影響。流式細(xì)胞儀用AnnexinVFITC和PI雙染檢測(cè)U251、U87和SHG44細(xì)胞凋亡率。HE染色、Ho

2、echst33342熒光染色、透射電鏡(TEM)觀察U251細(xì)胞形態(tài)改變，流式細(xì)胞儀測(cè)定U251細(xì)胞的細(xì)胞周期改變。結(jié)果Res明顯抑制U251、U87和SHG44細(xì)胞的生長(zhǎng)和增殖（P＜0.01）且對(duì)U87細(xì)胞的抑制作用最強(qiáng)，U251和SHG44細(xì)胞次之；對(duì)U251細(xì)胞的抑制作用呈濃度及時(shí)間依賴性反應(yīng)；Res所致的U251、U87和SHG44膠質(zhì)瘤細(xì)胞凋亡為濃度依賴關(guān)系，且對(duì)U87細(xì)胞的凋亡作用強(qiáng)于U251和SHG44細(xì)胞。U251凋亡細(xì)胞的細(xì)胞周期主要發(fā)生G1期阻滯。結(jié)論Res對(duì)U251、U87和SHG44細(xì)胞生長(zhǎng)抑制及凋亡作用以U87

3、細(xì)胞更明顯，對(duì)U251細(xì)胞的抑制作用呈濃度及時(shí)間依賴性反應(yīng)并引起了其細(xì)胞周期改變。【關(guān)鍵詞】白藜蘆醇；膠質(zhì)細(xì)胞瘤；細(xì)胞凋亡　　parisonStudyonResveratrolSuppressingHumanGliomaCellsGroa；Apoptosis　　0引言Res是一種多酚類化合物，化學(xué)名為3，5，4’三羥基反均二苯代乙烯(3，5，4’trihydroxystilbene,C14H12O3)，分子量228.2[1]。近年來對(duì)其抗腫瘤作用研究較廣泛。本研究旨在證明Res可抑制人源腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞系U251生長(zhǎng)并導(dǎo)致其發(fā)生凋亡及細(xì)胞周期

4、改變，探討生長(zhǎng)抑制與劑量、時(shí)間及凋亡與劑量的關(guān)系，并與Res抑制U87及SHG44腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞生長(zhǎng)及誘導(dǎo)凋亡的作用比較?！　?材料與方法　　1.1材料Res購(gòu)自Sigma公司，用DMSO溶解配成200mmol/L貯存液-20℃凍存?zhèn)溆?；U251、U87和SHG44細(xì)胞系由本研究所提供；DMEM培養(yǎng)基購(gòu)自Gibico公司；胎牛血清購(gòu)自灝洋生物公司；MTT、Hoechst33342熒光試劑盒、AnnexinVFITC和PI均為Sigma公司產(chǎn)品?！　?.2方法　　1.2.1細(xì)胞培養(yǎng)　　U251、U87和SHG44細(xì)胞在含10%胎牛血清的DME

5、M培養(yǎng)液中，置于37℃、5%CO2孵箱中培養(yǎng)，0.25%胰蛋白酶消化傳代?！　?.2.2MTT法　　實(shí)驗(yàn)首先進(jìn)行3種細(xì)胞Res處理24h的生長(zhǎng)狀態(tài)比較，取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期U251、U87和SHG44細(xì)胞，接種至96孔板內(nèi)；實(shí)驗(yàn)按3種細(xì)胞分3組，每組將Res分7個(gè)不同濃度梯度，分別為5、25、50、100、200、300、400μmol／L的處理組及濃度為0μmol／LRes的等量DMSO的對(duì)照組，每種濃度設(shè)6個(gè)重復(fù)孔，并以空白孔調(diào)零。各組細(xì)胞培養(yǎng)24h后，將培養(yǎng)液換成含不同濃度Res的培養(yǎng)液，繼續(xù)培養(yǎng)24h，隨后每孔加入20μl、5g/L的MTT，繼

6、續(xù)培養(yǎng)4h，最后每孔加150μlDMSO振蕩10min，酶標(biāo)分析儀檢測(cè)490nm波長(zhǎng)的光密度值(Opticaldensity，OD)。其次按照同樣方法進(jìn)行Res處理U251、U87和SHG44細(xì)胞6h、24h、48h的分組及其細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)的MTT法OD值測(cè)量。所得數(shù)據(jù)用SPSS10.0軟件計(jì)算均數(shù)及標(biāo)準(zhǔn)差，并進(jìn)行方差分析，組間差異采用Duntt檢驗(yàn)?！　?.2.3流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞周期及AnnexinVFITC和PI雙染檢測(cè)細(xì)胞凋亡率　　消化收集200μmol/LRes處理24h的U251細(xì)胞及對(duì)照組細(xì)胞，調(diào)整細(xì)胞濃度1×106/ml各取4

7、ml，按常規(guī)細(xì)胞周期樣品檢測(cè)方法作程序性處理后進(jìn)行流式細(xì)胞儀檢測(cè)；分別消化收集300、150、50、5μmol/LRes處理24h組的U251、U87和SHG44細(xì)胞和DMSO對(duì)照組的細(xì)胞，加入5μlAnnexinVFITC和5μlPI于細(xì)胞懸液中避光染色10min，流式細(xì)胞儀檢測(cè)凋亡的百分比，數(shù)據(jù)用multicycle分析軟件處理?！　?.2.4凋亡細(xì)胞的光鏡觀察　　將U251傳代細(xì)胞接種于蓋玻片表面，培養(yǎng)24h后，換成含200μmol/LRes的DMEM培養(yǎng)液，繼續(xù)培養(yǎng)24h后，HE染色，光鏡觀察。　　1.2.5凋亡細(xì)胞的Hoechst3

8、3342熒光檢測(cè)　　200μmol/LRes處理24h的U251細(xì)胞按熒光染色試劑盒方法逐步進(jìn)行后熒光顯微鏡下攝片?！　?.2.6凋亡細(xì)