柴胡有效成分提取工藝的研究

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1、柴胡有效成分提取工藝的研究肖功勝，楊云，孫維英，馮云霞，朱振華【摘要】　　目的確定柴胡有效成分提取的最佳工藝。方法以柴胡中揮發(fā)油吸收度和柴胡皂苷a的含量為指標(biāo)，采用單因素實(shí)驗(yàn)篩選主要因素和水平，再以正交實(shí)驗(yàn)篩選柴胡有效成分提取最佳工藝。結(jié)果最佳工藝參數(shù)為40℃溫浸，收集相當(dāng)于藥材2倍量蒸餾液，繼用8倍量含5%氨水的95%乙醇回流1h提取柴胡皂苷，可使揮發(fā)油吸收度達(dá)0.941，柴胡皂苷a的含量達(dá)0.32%。結(jié)論該工藝為柴胡有效成分的提取提供了可靠依據(jù)，且工藝條件穩(wěn)定可靠，重復(fù)性好?！娟P(guān)鍵詞】提取工藝柴胡皂苷a揮發(fā)油正交實(shí)驗(yàn)　　Abstrac

2、t：ObjectiveTodeterminetheoptimumtechnologyofactiveingredientsfromBupleurumchinenseDC.MethodsETTLERAE240電子分析天平（瑞士）?！　?.2試藥柴胡藥材購于河南省藥材公司，經(jīng)本院陳隨清教授鑒定為傘形科植物柴胡BupleurumchinenseDC.的干燥根；柴胡皂苷a對(duì)照品自制，經(jīng)峰面積歸一化法測(cè)定含量為：99.91%；乙腈為色譜純；水為雙重蒸餾水；其他試劑均為分析純?！　?方法　　2.1單因素實(shí)驗(yàn)　　分別以藥材浸漬溫度、浸漬時(shí)間、料液體積比

3、、蒸餾液收集量等為因素，在不同水平下進(jìn)行單因素實(shí)驗(yàn)，篩選出影響柴胡揮發(fā)油提取的主要因素和水平，同樣分別以乙醇濃度、pH值、柴胡皂苷提取時(shí)間、料液體積比等為因素，在不同水平下進(jìn)行單因素實(shí)驗(yàn)，篩選出影響柴胡皂苷提取的主要因素和水平。從而為正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)提供依據(jù)?！　?.2揮發(fā)油的提取和測(cè)定方法隨機(jī)稱取50g柴胡干燥粗粉，置于500ml圓底燒瓶中，采用水蒸氣蒸餾法在不同條件下提取柴胡揮發(fā)油，收集蒸餾液，加3%丙二醇搖勻，精密量取上述蒸餾液2ml兩份，一份置5ml容量瓶中，加蒸餾水定容，搖勻，作為樣品液，另一份置蒸發(fā)皿中，置水浴上蒸干，殘?jiān)谜麴s水

4、溶解，轉(zhuǎn)移至5ml容量瓶中，加蒸餾水定容，搖勻，作為空白。用752紫外分光光度計(jì)在277nm波長處測(cè)定蒸餾液中揮發(fā)油的吸收度?！　?.3柴胡皂苷的提取取提取揮發(fā)油后的藥渣，濾干，置于500ml圓底燒瓶中，在不同條件下回流提取柴胡皂苷，過濾得濾液，減壓低溫濃縮成每毫升含0.5g柴胡的濃縮液，備用?！　?.4柴胡皂苷a含量測(cè)定　　2.4.1色譜條件大連伊利特C18(4.6mm×250mm,5μm)；流動(dòng)相為乙腈-水37∶63；流速1ml/min；檢測(cè)波長208nm；柱溫35℃；進(jìn)樣量20μl?！　?.4.2對(duì)照品溶液的制備精密稱取柴胡皂苷a對(duì)

5、照品5.09mg，加甲醇溶解并定容至10ml，搖勻，配成0.509mg/ml對(duì)照品溶液，冷藏備用?！　?.4.3供試品溶液的制備取上述濃縮液10ml減壓蒸干，加20ml甲醇溶解殘?jiān)^濾得濾液。再取2ml濾液至10ml容量瓶中，加甲醇定容，搖勻，冷藏備用?！　?.4.4線性范圍考察精密吸取對(duì)照品儲(chǔ)備液2.0，6.0，10.0，14.0，18.0μl，在“2.4.1”項(xiàng)下色譜條件下進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積，以峰面積積分值Y為縱坐標(biāo)，對(duì)照品溶液進(jìn)樣量X（μl）為橫坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸（n=5），得線性回歸方程為Y=209413.7X－162379.

6、4，線性范圍為0.9720～9.635μg，相關(guān)系數(shù)為r=0.9997，線性關(guān)系良好。　　2.4.5精密度實(shí)驗(yàn)　　精密吸取對(duì)照品20μl，在“2.4.1”項(xiàng)下色譜條件下重復(fù)進(jìn)樣5次測(cè)定，記錄峰面積，RSD為1.5%（n=5），表明精密度良好?！　?.4.6穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)　　將供試品溶液在室溫下貯存，在“2.4.1”項(xiàng)下色譜條件下，分別于0，2，4，6，8h進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積，RSD為2.0%，表明樣品在8h內(nèi)穩(wěn)定。　　2.4.7重復(fù)性實(shí)驗(yàn)　　精密稱取同一批樣品5份，按供試品溶液處理方法制備樣品溶液，在“2.4.1”項(xiàng)下色譜條件下重復(fù)進(jìn)樣測(cè)定

7、5次，記錄峰面積，RSD為2.1%（n=5）。　　2.4.8樣品測(cè)定精密吸取20μl樣品溶液，在“2.4.1”項(xiàng)下色譜條件下進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積，計(jì)算各樣品中柴胡皂苷a的含量?！　?.5正交實(shí)驗(yàn)以柴胡蒸餾液中揮發(fā)油的吸收度和柴胡皂苷a的含量為檢測(cè)指標(biāo)，參照單因素實(shí)驗(yàn)結(jié)果，分別以藥材浸漬溫度、揮發(fā)油收集量、柴胡皂苷提取時(shí)間、柴胡皂苷提取溶劑料液比等主要因素及不同水平進(jìn)行L9(34)正交設(shè)計(jì)，篩選最佳工藝。正交實(shí)驗(yàn)因素和水平見表1。表1正交實(shí)驗(yàn)因素及水平（略）　　3結(jié)果　　3.1浸漬溫度對(duì)揮發(fā)油提取效果的影響分別在30，40，60，80℃溫度

8、下浸漬6h，料液比1∶6，提取1次，考察浸漬溫度對(duì)揮發(fā)油提取效果的影響。測(cè)得吸收度依次為：0.303，0.984，0.758，0.587。由測(cè)定結(jié)果可知，在40℃下浸漬吸收度達(dá)到最大。且變化顯