表沒食子兒茶素沒食子酸酯誘導人肝癌smmc

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1、表沒食子兒茶素沒食子酸酯誘導人肝癌SMMC【摘要】目的：觀察表沒食子兒茶素沒食子酸酯（EGCG）誘導人肝癌(SMMC-7721)細胞系，細胞凋亡的生物學效應。方法：通過MTT比色法檢測EGCG對SMMC-7721細胞生長的影響；應用細胞計數(shù)法研究不同濃度EGCG對SMMC-7721細胞生長曲線的影響；PI染色流式細胞術研究EGCG對SMMC-7721細胞周期和凋亡率的影響。結果：EGCG顯著抑制人肝癌SMMC-7721細胞的生長，呈濃度依賴性；SMMC-7721細胞經(jīng)EGCG作用后，其細胞群體倍增時間明顯延長，細胞增殖周期延長，從而細胞增殖速度減慢；流式細胞術分析結果表明EGC

2、G（30μg/mL、60μg/mL、120μg/mL）處理SMMC-7721細胞48h后，G1期細胞累積均逐漸增加。結論：EGCG具有誘導人肝癌SMMC-7721細胞凋亡的作用，其機制可能與使細胞周期G1期阻滯相關。【關鍵詞】肝腫瘤；表沒食子兒茶素沒食子酸酯；細胞周期；凋亡　　AbstractObjective:Toinvestigatetheeffectofepigallocatechin-3-gallateoninductionofapoptosisinlivercancercelllineSMMC-7721.Methods:ThegroeasuredbyMTTassay.

3、CellcoutingmethodinedbyPIstainingfloetry.Results:EGCGsignificantlyinhibitedthegroanner.CellcountingshoeincreasedbyEGCGinaconcentrationdependentmanner.PIstainingfloetryshoanner.Conclusion:EGCGpossesesantitumoreffectinvitro,itsmechanismmightbeassociateds;Epigallocatechin-3-gallate;Cellcyle;Apo

4、ptosis　　腫瘤的發(fā)生與細胞凋亡有密切關系，細胞凋亡調(diào)控的失調(diào)是導致腫瘤形成的一個重要條件［１］。近些年，因為茶及其組分對人健康的潛在益處使得對茶的研究越來越廣泛。綠茶含有特殊的多酚物質(zhì)，主要是兒茶素。綠茶兒茶素中表沒食子兒茶素沒食子酸酯（epigallocatechin-3-gallate,EGCG）含量最高而且生物活性最強，能明顯抑制腫瘤細胞的生長。其具體機制尚不十分清楚，可能與其誘導腫瘤細胞凋亡、阻滯細胞周期、誘導分化和抗腫瘤轉移等有關［２］。利用EGCG處理不同的腫瘤細胞，均顯示有較強的抑制腫瘤細胞增殖的效應。研究表明，EGCG對前列腺癌［３］、肺癌［４］、白血?。?/p>

5、５］、鼻咽癌、大腸癌、宮頸癌等腫瘤均有較強的抑制作用。腫瘤細胞的一個共同特征是細胞周期調(diào)控機制的破壞導致細胞的失控性生長。眾多的癌基因、抑癌基因參與細胞生長、分裂、死亡的調(diào)控，最終表現(xiàn)為對細胞周期的調(diào)控。我們推測EGCG可能通過誘導SMMC-7721細胞周期阻滯而發(fā)揮其抑制增殖的效應。因此，本研究對EGCG進行了體外抗腫瘤活性測定,并應用流式細胞術分析其對腫瘤細胞周期的影響。　　1材料和方法　　1.1材料　　細胞及細胞培養(yǎng)：人肝癌細胞SMMC-7721由中科院上海細胞生物學研究所引進。用含10%新生牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)液，在37℃，5%CO2混合氣體,95%濕度的培養(yǎng)

6、箱內(nèi)培養(yǎng)，取對數(shù)生長期細胞用于實驗?！　∷幤放c試劑：EGCG：Sigma公司產(chǎn)品，純度95%。小牛血清：杭州四季青生物工程公司產(chǎn)品，MTT為Amresco公司產(chǎn)品?！　?.2方法　　1.2.1MTT比色法測定：取對數(shù)生長期細胞，接種于96孔平底培養(yǎng)板，每孔180μL(含0.9×104細胞)。培養(yǎng)6h后加入處理因素并設空白對照，使EGCG的終濃度為20μg/mL、40μg/mL、60μg/mL、80μg/mL、100μg/mL、120μg/mL每組設4個平行孔，繼續(xù)培養(yǎng)48h。然后每孔加入MTT20μL（5mg/mL），4h后即終止培養(yǎng)，棄上清液，每孔加入200μLDMSO，振蕩

7、搖勻，置酶聯(lián)免疫檢測儀在570nm波長處測量吸光度（A）值，按以下公式計算細胞增殖抑制率：抑制率=（1-試驗組A值/對照組A值）×100%?！　?.2.2生長曲線及倍增時間測定：①取對數(shù)生長期細胞,常規(guī)胰酶消化制備單細胞懸液，調(diào)節(jié)細胞密度為2×104/mL，接種于24孔板,每孔1mL(2×104細胞/孔)，培養(yǎng)6h待細胞貼壁后分別加入處理因素并設空白對照，使EGCG的終濃度為20μg/mL、40μg/mL、60μg/mL、80μg/mL、100μg/mL每個濃度設3個復孔,以上實驗重復三次。