表沒(méi)食子兒茶素沒(méi)食子酸酯抑制地塞米松體外誘發(fā)兔白

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1、表沒(méi)食子兒茶素沒(méi)食子酸酯抑制地塞米松體外誘發(fā)兔白【摘要】　　目的：觀察表沒(méi)食子兒茶素沒(méi)食子酸酯(EGCG)對(duì)抑制地塞米松(Dex)誘導(dǎo)體外培養(yǎng)兔晶狀體上皮細(xì)胞(LEC)凋亡的作用。方法：采用體外培養(yǎng)正常家兔晶狀體，隨機(jī)將家兔晶狀體分為3組：空白對(duì)照組(A)；Dex（10μmol/L）處理組(B)；Dex+EGCG（10mmol/L）實(shí)驗(yàn)組(C)。分別于3，5，7d培養(yǎng)結(jié)束后觀察各組晶狀體的透明度，并進(jìn)行相關(guān)比較及統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。TUNEL法檢測(cè)EGCG對(duì)Dex誘發(fā)的兔LEC凋亡細(xì)胞數(shù)量的影響，并進(jìn)行相關(guān)比較及統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。結(jié)果：EGCG實(shí)驗(yàn)組晶狀體透明性均低于空

2、白對(duì)照組，但高于Dex處理組，差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)；Dex處理組LEC凋亡率顯著高于空白對(duì)照組（P＜0.01）；Dex處理組與EGCG實(shí)驗(yàn)組比較，有顯著性差異（P＜0.01）。結(jié)論：EGCG可抑制Dex損傷所誘導(dǎo)兔LEC調(diào)亡，具有明顯抑制激素性白內(nèi)障形成的作用。【關(guān)鍵詞】表沒(méi)食子兒茶素沒(méi)食子酸酯;白內(nèi)障;地塞米松；晶狀體上皮細(xì)胞；凋亡　　AbstractAIM:Toobservetheinhibitoryeffectofepigallocatechingallate(EGCG)onapoptosisoflensepithelialcell

3、(LEC)ofrabbitsdexamethason（Dex）peroxideinduced.METHODS:Culturednormalrabbitlensinvitrolydividedinto3groups:thecontrolgroup（A）,thegrouptreatedbyDex(10μmol/L)（B）,thegrouptreatedbyDexperoxideandEGCG(10mmol/L)（C）.Thetransparenceandapoptosisratiooflensonthetimepointsof3,5,7daysinedbyim

4、ageanalysisandfloetry,asinaldeoxyribonucleotidetransferasemediatedUTPnickendlabeling（TUNEL）detection，theeffectofEGCGonthenumberofdexamethasoninducedrabbitLECined，therelatedparisonsandstatisticalanalysesonggroupsethodrevealedthattheapoptosisrateofLECinDexgroupentofthecataract.　　

5、KEYA公司）；DMEM培養(yǎng)基（Hyclone公司）；TUNEL試劑盒（武漢boster公司）。正常成年家兔50只，經(jīng)耳緣靜脈注射空氣形成栓塞致死，立即摘取眼球于超凈工作臺(tái)后路法小心取出晶狀體，清除干凈玻璃體，置入含青霉素80萬(wàn)U+慶大霉素8萬(wàn)U的生理鹽水500mL中，1min后取出置入5mLDMEM低糖培養(yǎng)液（含100mL/L小牛血清，100kU/L青霉素圖1培養(yǎng)晶狀體上皮細(xì)胞(HE×400)A：空白對(duì)照組;B：Dex模型組;C：EGCG組。和100kU/L鏈霉素）的12孔培養(yǎng)板內(nèi)，每孔一個(gè)晶狀體，于37℃，50mL/LCO2培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)6h，選取透明晶

6、狀體作為下一步實(shí)驗(yàn)對(duì)象，其中10只晶狀體可能由于手術(shù)損傷或其他原因致其混濁而被排除，留取90只透明晶狀體備用?！　　　?.2　方法　　對(duì)照組(A組)：將篩選后的透明晶狀體30只置于DMEM培養(yǎng)液5mL的12孔培養(yǎng)板內(nèi)，每孔1個(gè)晶狀體，置于37℃，50mL/LCO2培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)，每12h更換一次培養(yǎng)液以確保營(yíng)養(yǎng)充足。處理組(B組)：將篩選后的透明晶狀體30只置于DMEM+Dex（終濃度為10μmol/L）培養(yǎng)液5mL的12孔培養(yǎng)板內(nèi)，每孔1個(gè)晶狀體,置于37℃，50mL/LCO2培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)，每12h更換一次培養(yǎng)液以確保營(yíng)養(yǎng)充足。實(shí)驗(yàn)組(C組)：用DMEM配

7、置100mmol/LEGCG母液，將篩選后的透明晶狀體30只置于C組:含DMEM+Dex（終濃度為10μmol/L）+EGCG（終濃度為10mmol/L）培養(yǎng)液5mL的12孔培養(yǎng)板內(nèi)，每孔1個(gè)晶狀體,置于37℃，50ml/LCO2培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)，每12h更換1次培養(yǎng)液以確保營(yíng)養(yǎng)充足。于培養(yǎng)結(jié)束后，將12孔培養(yǎng)板置于帶有2mm×2mm黑色網(wǎng)格的透明膠片上分析。晶狀體混濁程度參照Azuma等的標(biāo)準(zhǔn)分為5級(jí)：Ⅰ級(jí)：無(wú)混濁，晶狀體透明；Ⅱ級(jí)：輕度混濁，晶狀體周邊出現(xiàn)空泡；Ⅲ級(jí)：中度混濁，晶狀體周邊空泡向中心擴(kuò)展，核出現(xiàn)霧狀混濁；Ⅳ級(jí)：高度混濁，晶狀體周邊空泡擴(kuò)展到核

8、區(qū)，核霧狀混濁加重；Ⅴ級(jí)：核混濁，白內(nèi)障成熟。觀察晶狀體上皮細(xì)胞排