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1、分類號S7密級公開UDC630全日制碩士專業(yè)學(xué)位研究生學(xué)位論文毛竹MYB基因脅迫誘導(dǎo)型啟動子的結(jié)構(gòu)與功能分析作者姓名：王蕾指導(dǎo)教師：張智俊副教授專業(yè)學(xué)位名稱：農(nóng)業(yè)推廣碩士領(lǐng)域名稱：林業(yè)研究方向：森林培育所在學(xué)院：林業(yè)與生物技術(shù)學(xué)院論文提交日期：2017年2月28日浙江農(nóng)林大學(xué)2017年2月28日ZhejiangA&FUniversityDissertationfortheDegreeofMasterStructureandFunctionalAnalysisofInduciblePromoterofthePhyllosta
2、chysedulisMYBgeneCandidate:WANGLeiAdviser:ZHANGZhi-junAssociateprofessorSpecialty:ForestryDateofSubmission:February28,2017ZhejiangA&FUniversityLin’an,zhejiangprovince,P.R.ChinaFebruary,2017摘要毛竹（Phyllostachysedulis）是我國分布最廣，種植面積最大，資源最多，開發(fā)利用最高的優(yōu)良竹類植物。毛竹適合在濕潤、高溫、微酸性或中
3、性土壤的地區(qū)生長。低溫、干旱、黑暗等逆境會對毛竹的生長發(fā)育產(chǎn)生嚴(yán)重的影響，因此研究毛竹的抗逆機(jī)制具有重要意義。本文基于本實驗室對毛竹抗逆基因PeMYB的研究，采用PCR擴(kuò)增的方法對毛竹PeMYB啟動子進(jìn)行克隆，并進(jìn)行生物信息學(xué)分析，以及該啟動子全長的活性驗證和5’端缺失的功能分析研究。研究結(jié)果如下：1.采用PCR擴(kuò)增的方法對毛竹PeMYB基因的啟動子進(jìn)行克隆，獲得長度為1332bp的毛竹PeMYB基因的啟動子序列PeMYBpro，基因編號為PH01000142。2.運用PLANTCARE軟件對PeMYBpro啟動子序列進(jìn)行
4、生物信息學(xué)分析；結(jié)果顯示PeMYBpro啟動子序列中不僅包含MYB的核心元件；也含有大量與光、低溫、干旱、脫落酸、茉莉酸、水楊酸、赤霉素等非生物脅迫有關(guān)的響應(yīng)元件。3.通過構(gòu)建pCAMBIA1301-PeMYBpro啟動子全長植物表達(dá)載體分析PeMYBpro啟動子活性；在洋蔥表皮中進(jìn)行pCAMBIA1301-PeMYBpro的瞬時表達(dá)分析；GUS基因的活性染色表明PeMYBpro啟動子具有誘導(dǎo)型啟動子活性，且在低溫、干旱、黑暗脅迫誘導(dǎo)下有較強(qiáng)的活性。4.成功構(gòu)建pCAMBIA1301-PMpro-P1、pCAMBIA130
5、1-PMpro-P2、pCAMBIA1301-PMpro-P3、pCAMBIA1301-PMpro-P4四個5’缺失植物表達(dá)載體；瞬時表達(dá)分析后，分別對GUS基因進(jìn)行活性染色分析和定量分析。結(jié)果顯示：這4個片段都具有誘導(dǎo)型啟動子得活性，啟動子PeMYBpro在-1332~-1033bp之間并無與干旱、低溫、黑暗三類脅迫密切相關(guān)的啟動子元件；在-1032~-740bp之間存在大量與干旱脅迫有關(guān)的響應(yīng)元件；在-450~-141bp之間存在能夠響應(yīng)低溫脅迫的元件；在-1032~-740bp和-449~-141bp之間存在大量與光
6、響應(yīng)相關(guān)的啟動子元件。關(guān)鍵詞：毛竹，PeMYBpro啟動子，克隆，功能分析，瞬時表達(dá)IAbstractPhyllostachysedulisisabundantbambooresourceswiththemostwidelydistributed,thelargestplantingareaandexploitationandutilizationofthehighestvalueinchina.Phyllostachysedulisusuallygrowsindamp,hightemperature,acidicorne
7、utralsoilregion.Lowtemperature,droughtanddarkstresscanseriouslyaffectthephyllostachysedulisnormalgrowth.Therefore,thestudyonitsstressresistancemechanismisimportantsignificance.ThispaperstudiesonresistancegenePeMTBofphyllostachysedulis,adoptingPCRamplificationtoclo
8、neMYBpromoterofphyllostachysedulisandbioinformaticsanalysis,aswellasthepromoteractivityoftotallengthofverificationandlackof5’endoffunctionalanalysis.The
