缺氧誘導(dǎo)絲裂原因子作為細(xì)胞外鈣敏感受體的非經(jīng)典配體在慢性缺氧性肺動脈高壓中的作用和機(jī)制

缺氧誘導(dǎo)絲裂原因子作為細(xì)胞外鈣敏感受體的非經(jīng)典配體在慢性缺氧性肺動脈高壓中的作用和機(jī)制

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1、編:一.,'L’.A盛分類號學(xué)寫D201478050學(xué)棱代碼10487密敬#情投巧.^制學(xué)総文義;缺氧誘導(dǎo)絲裂原附作為細(xì)胞外錫敏?。壐惺荏w的非經(jīng)規(guī)體也陵牲缺雛臟脈離巾誘肺機(jī)制^學(xué)位申請人:曾鱗J學(xué)科專業(yè):細(xì)學(xué)與細(xì)生理學(xué)it指導(dǎo)教師:繼華教授答辯日期:2017年5月■^*ADisseitationSubmittedtoHuazhonUniversitofgyScienceandTechnologyfortheDereeofgDoctorofMedicine

2、Theroleandmechanismofhoxiainducedmitoenicfactorypga-sanonclassicalLiandforextracellularcalciumsensitivegreceptorinhoxiculmonarhertensionyppyyph.D.Candidate:ZenXianinpgqMaor:atholoandathohsiolojpgyppygySuervisor:HuinhuarofessorpQgpHuazh

3、onUniversitofScienceandTechnologygyWuhan,Hubei430074,P.R.ChinaMa2017y,獨(dú)創(chuàng)性聲明本人聲明所呈交的學(xué)位論文是我本人在導(dǎo)師指導(dǎo)T進(jìn)巧的研究X作及取得的研究成果。盡我所知,除文中已經(jīng)標(biāo)明引用的內(nèi)容外,本論文不包含化何其他個人或集體己經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果,。對本文的研究做出巧獻(xiàn)的個人和集體均已在文中W明確方式標(biāo)明。本人完全意識到本聲明的法律巧果由本人承擔(dān)。尿參學(xué)位論文作呼■^曰期:如年I月衣日?學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書本學(xué)位

4、論文作者完全了解學(xué)校有關(guān)保留,:、使用學(xué)位論文的規(guī)定即學(xué)校有權(quán)保留并向國家有關(guān)部口或機(jī)構(gòu)送交論文的復(fù)印件和電子版,允許論文被查閱和借閱。本人授權(quán)華中科技大學(xué)可將本學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫進(jìn)行檢索,可采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存和匯編本學(xué)位論文。保密□,年解密后適用本授權(quán)書在。本論文不保密V。""、(請在上方框內(nèi)打V)、類學(xué)位論文作者簽名;考iW指導(dǎo)教師簽名:乂>節(jié)曰船年¥月^日曰期:年月曰■\目錄中文摘要13英i摘要6引胃7材料與方法24

5、W48ife5056附錄64i91lilt華中科技大學(xué)博壬學(xué)位論文缺氧誘導(dǎo)絲裂原因子作為細(xì)胞外鉤敏感受體的非經(jīng)典配體在慢性缺氧性肺動脈高壓中的作用和機(jī)制博±生:曾憲琴導(dǎo)師;胡清華教授摘要目的:研究缺氧誘導(dǎo)絲裂原因子(hypoxiaimlucedmitogenicfactor,HIM巧作為細(xì)胞外extrace-llularcalciumsensinrecetorCaS民)的非經(jīng)典配體在慢性缺氧巧敏感受體的,(gplartersmoo化musclecellsPASMCs誘導(dǎo)

6、的肺動脈平滑肌細(xì)胞(pumonaryy,)的增殖和肺動脈高壓中的作用和機(jī)制。方法:(1)通過免疫沉淀技術(shù)篩選出在慢性缺氧性肺動脈高壓中和HIMF相互作用的G2)SMCs;(3)HIMF蛋白偶聯(lián)受體;(原代培養(yǎng)PA免疫共沉淀技術(shù)和免疫巧光技術(shù)檢測和CaS民的相互作用和共定位情況;(4)酵母雙雜交技術(shù)篩選出和團(tuán)MF主要作用的2+CaS民氨基酸位點(diǎn):(引用不同的細(xì)胞外巧離子濃度([Ca]。)處理PASMCs后用巧離子2+Fum-2/AM和巧離子巧光成像系統(tǒng)檢測胞漿內(nèi)巧離子濃度C巧光探針(ai);[]6PASMCs轉(zhuǎn)染CaS

7、民shRNA和CaS民突變質(zhì)粒(突變CaSR和HIMF特異性結(jié)合的四()個氨基酸位點(diǎn)的質(zhì)粒)下調(diào)和突變CaS民的表達(dá),PASMCs轉(zhuǎn)染HIMFsh民NA和HIMF過表達(dá)質(zhì)粒下調(diào)和上調(diào)排MF的表達(dá);(7)合成特異性的穿膜膚競爭HIMF和CaS民的結(jié)合位點(diǎn),阻止HIMF和CaS民的結(jié)合;(8)用CCK8試劑盒檢測PASMCs增殖的情況;9)Calhex231和SDSD;lOwestem(特異性穿膜膚注射大鼠和慢病毒感染大鼠()和E化ISA檢測慢病毒效應(yīng);(11)powerlab檢測肺動脈壓、體循環(huán)壓和也輸出量;12IMFaS民

8、aSR二3通過巧成()wes化m檢測H和C的結(jié)合是否影響C聚體的形成;(1)像技術(shù)檢測抑

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