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1、大鼠提睪肌神經(jīng)損傷后血管內(nèi)皮細(xì)胞的凋亡 Keyaster;endothelium，vascular;apoptosis Abstract:AIMTostudytheapoptosisofvascularendothe-lialcellasternerveoftherat.METHODSTheexpressionofBcl-2，Baxandp53inendothelialcellsasternerveeansofimmunohistochemicalSPmethod.RESULTSTheexpres-sionofBcl-2，Bax
2、andp53inendothelialcellofinjuredcre-mastermerveincreasedobviously，andreachedthehightestlevelIberofpositivecellofBaxandp53asterNerveinjurycouldresultinapoptosisoftheendothelialcellsandmightplayanimportantroleinthedysfunctionofmicro-circulation. 0引言 血管內(nèi)皮細(xì)胞具有復(fù)雜的生物學(xué)功能，其中
3、包括促凝、抗凝、調(diào)節(jié)血管張力、影響血管生成、合成基質(zhì)及調(diào)節(jié)和加重炎癥等［1-3］.血管內(nèi)皮細(xì)胞的正常生理功能除因創(chuàng)傷、內(nèi)毒素等，氧自由基及Ca2+超載等因素遭受損傷和影響外，血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡則是已受到重視的影響其存活及一系列病理生理改變的重要因素之一［4-6］.有關(guān)研究顯示，大鼠提睪肌血管內(nèi)皮細(xì)胞有CGRP，NPY等肽類神經(jīng)遞質(zhì)的分布，并認(rèn)為對(duì)其生理功能有重要作用［7］.在血管創(chuàng)傷和手術(shù)修復(fù)中，有關(guān)神經(jīng)常可遭受損傷，失去神經(jīng)支配的血管內(nèi)皮細(xì)胞是否出現(xiàn)過度凋亡，參與微循環(huán)障礙，目前尚未見報(bào)道.我們以大鼠提睪肌神經(jīng)損傷微循環(huán)模型，對(duì)血管
4、內(nèi)皮細(xì)胞的Bal-2，Bax及p53表達(dá)情況進(jìn)行研究，以探討神經(jīng)損傷后血管內(nèi)皮細(xì)胞的凋亡及其對(duì)微循環(huán)的影響和作用. 1材料和方法 1.1材料 成年雄性SD大鼠35只，體質(zhì)量（250±30）g，由本校實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心標(biāo)準(zhǔn)飼養(yǎng)室提供.其中30只平均分為術(shù)后24，72h及1.切片經(jīng)脫蠟和水化后，依次以氧化酶阻斷劑和非免疫血清室溫孵育10min，Bcl-2，Bax（140）和p53（1100）單克隆抗體室溫孵育60min，生物素標(biāo)記第二抗體和鏈霉菌抗生物素-過氧化酶（三抗）各室溫孵育10min.最后以DAB呈色反應(yīng)5～10min.自來水沖
5、洗終止反應(yīng).除部分p53切片外，其余切片均以蘇木精復(fù)染.切片脫水、透明及封片.對(duì)照組動(dòng)物和實(shí)驗(yàn)組動(dòng)物非手術(shù)側(cè)提睪肌標(biāo)本切片實(shí)驗(yàn)方法步驟同上.用PBS分別代替第一、二、三抗體做陰性對(duì)照. 結(jié)果判定及統(tǒng)計(jì)學(xué)分析:條狀血管內(nèi)皮細(xì)胞胞質(zhì)出現(xiàn)棕黃色顆粒為Bcl-2及Bax陽性細(xì)胞，血管內(nèi)皮細(xì)胞核出現(xiàn)棕黃色顆粒為p53陽性細(xì)胞.觀察10個(gè)連續(xù)切片，選血管密集處中的5個(gè)400倍視野計(jì)數(shù)平均100個(gè)細(xì)胞中的陽性細(xì)胞作為調(diào)亡指數(shù)，以反映調(diào)亡程度.所得各組數(shù)據(jù)以x±s表示，采用χ2檢驗(yàn)分析.2結(jié)果 2.1Bcl┐2，Bax和p53在血管內(nèi)皮細(xì)胞的表
6、達(dá) Bcl-2，Bax和p53陽性細(xì)胞位于血管壁內(nèi)表面的內(nèi)皮細(xì)胞層，鏡下可見Bcl-2和Bax陽性內(nèi)皮細(xì)胞核兩側(cè)扁平窄條狀細(xì)胞質(zhì)內(nèi)充滿棕黃色顆粒，但在細(xì)胞膜內(nèi)外側(cè)也有同樣的陽性顆粒（Fig1～3）.p53陽性細(xì)胞表現(xiàn)為突入血管腔的棱形或橢圓形細(xì)胞核為棕黃色顆粒，但胞質(zhì)也可見到（Fig4）.對(duì)照組動(dòng)物僅能見到少量陽性細(xì)胞.陰性代替試驗(yàn)結(jié)果均為陰性.在實(shí)驗(yàn)組動(dòng)物，Bcl-2，Bax和p53均有大量表達(dá)，在血管密集處，許多血管和毛細(xì)血管的內(nèi)皮細(xì)胞幾乎全為陽性.但出現(xiàn)陽性細(xì)胞的血管分布不均，常呈束狀分布，在肌束間血管束和毛細(xì)血管陽性細(xì)胞十
7、分密集，且著色很深.Bcl-2與Bax和p53的陽性細(xì)胞數(shù)量及表達(dá)強(qiáng)度比有所不同，在術(shù)后各個(gè)時(shí)間，Bax和p53的陽性表達(dá)明顯大于Bcl-2（P<0.01，Tab1）.表1Bcl-2，Bax及p53在血管內(nèi)皮細(xì)胞的表達(dá)（略） 2.2神經(jīng)損傷后不同時(shí)間的Bcl┐2，Bax及p53表達(dá) Bcl-2，Bax及p53在神經(jīng)損傷后的不同時(shí)間表達(dá)情況不同.神經(jīng)損傷24h，陽性細(xì)胞已較明顯，但是神經(jīng)損傷后72h陽性細(xì)胞的數(shù)量可達(dá)非常顯著，術(shù)后1matorymediatorsinthepathogenesisofsepsisandsept
8、icshock［J］.EurJClinInverst，1991;21:559-573. ?。?］GrauGE，deMoerlooseD，BullaO，LouJ，LeiZ，ReberG，RicouB，MorelDR，SuterPM.Ha
