大鼠提睪肌血管肽類(lèi)免疫反應(yīng)陽(yáng)性神經(jīng)纖維的分布論文

《大鼠提睪肌血管肽類(lèi)免疫反應(yīng)陽(yáng)性神經(jīng)纖維的分布論文》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線(xiàn)閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫(kù)。

1、大鼠提睪肌血管肽類(lèi)免疫反應(yīng)陽(yáng)性神經(jīng)纖維的分布論文.freeline’5-HT)、P物質(zhì)(substanceP’SP)和甲硫氨酸腦啡肽(methionineenkephalin’M-ENK)等一批對(duì)血管生理功能有重要影響的神經(jīng)活性物質(zhì)被發(fā)現(xiàn)［1，2］，為微循環(huán)的神經(jīng)調(diào)節(jié)增加了新的內(nèi)容.大白鼠提睪肌微循環(huán)研究動(dòng)物模型是上述研究的重要材料和手段［3］，但其血管上的神經(jīng)活性物質(zhì)分布情況還未見(jiàn)報(bào)道.血管內(nèi)皮細(xì)胞的生物學(xué)特性、功能及損傷均與微循環(huán)障礙有關(guān)［4，5］，上述各種活性物質(zhì)是否對(duì)其產(chǎn)生影響還無(wú)形態(tài)學(xué)依

2、據(jù).我們擬采用大白鼠提睪肌模型，對(duì)神經(jīng)活性物質(zhì)在各級(jí)血管上的分布進(jìn)行研究.freela公司產(chǎn)品.1.2方法成年雄性SD大鼠30只，平均分為CGRP’NPY’SP’5-HT及M-ENK共5組.所有動(dòng)物均以10gL-1’ip戊巴比妥鈉溶液麻醉，開(kāi)胸后經(jīng)主動(dòng)脈插管，依次灌入9gL-1生理鹽水100mL及30gL-1多聚甲醛磷酸緩沖液300mL.切開(kāi)一側(cè)腹股溝區(qū)皮膚，顯露提睪肌，從其腹側(cè)剪開(kāi)向兩側(cè)展開(kāi)，將睪丸推入腹股溝深處.在肉眼和解剖鏡下仔細(xì)剝離提睪肌上的小動(dòng)脈(精素外動(dòng)脈)，在肉眼下，從動(dòng)脈起始部，至

3、末端分支共分3級(jí).另一側(cè)提睪肌展開(kāi)后，以動(dòng)脈為中心將肌片取下，剝除血管表面肌組織以顯露動(dòng)脈便于免疫組化反應(yīng).所有組織置固定液后固定48h.免疫組織化學(xué)染色按ABC法操作.血管及組織片先入甲醇雙氧水以去除內(nèi)源性過(guò)氧化物酶活性，再入3gL-1牛血清Triton液封閉1h.各組材料分別依次進(jìn)兔抗CGRP’NPY’SP’5-HT及M-ENK抗血清、生物素標(biāo)記豬抗兔IgG血清及卵白素-生物素復(fù)合物，最后以DAB呈色反應(yīng)20min.在染色過(guò)程中，每次進(jìn)入抗血清前均以PBS緩沖液震蕩漂洗3遍，每遍5min.進(jìn)入

4、抗血清后，先于恒溫箱37℃孵育30min，后置4℃冰箱過(guò)夜.用PBS和正常牛血清分別代替第一抗體，用PBS代替第二抗體或ABC免疫復(fù)合物進(jìn)行代替試驗(yàn)以做對(duì)照.統(tǒng)計(jì)學(xué)處理:用交點(diǎn)計(jì)數(shù)法進(jìn)行半定量計(jì)數(shù)：在×10Olympus目鏡下，計(jì)數(shù)與纖維長(zhǎng)軸垂直的任一0.1mm目鏡網(wǎng)格線(xiàn)上纖維相交數(shù)量，每個(gè)血管分支任選3個(gè)視野同法計(jì)數(shù)，其平均值為本段血管神經(jīng)纖維的密度.平均數(shù)標(biāo)準(zhǔn)差以X±s表示，方差t檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理.2結(jié)果提睪肌動(dòng)脈及帶血管組織片經(jīng)ABC法染色后，各抗體免疫陽(yáng)性纖維呈金黃色或淡黃色，各抗體著色

5、一致，背景染色淺淡.對(duì)照試驗(yàn)均為陰性.2.1CGRP陽(yáng)性纖維和終末的分布特點(diǎn)CGRP陽(yáng)性纖維和終末廣泛分布于提睪肌動(dòng)脈各級(jí)分支中，但隨著動(dòng)脈的分支陽(yáng)性纖維和終末明顯減少’各級(jí)分支間陽(yáng)性纖維和終末數(shù)量差別明顯(P＜0.01’Tab1).在第1級(jí)分支，陽(yáng)性纖維和終末呈濃密顆粒狀，局部呈濃度斑塊狀.所有陽(yáng)性纖維圍繞動(dòng)脈形成網(wǎng)狀分布，其中有線(xiàn)狀和串珠狀結(jié)構(gòu)(Fig1).在稍細(xì)的第2級(jí)分支中，陽(yáng)性纖維有所減少，其形態(tài)與第1級(jí)分支相同(Fig2).至第3級(jí)分支以下，陽(yáng)性纖維和終末明顯減少，但顆粒狀、線(xiàn)狀、串珠

6、狀和網(wǎng)狀纖維的很明顯，其中呈網(wǎng)狀和與血管長(zhǎng)軸垂直之橫行排列纖維也常見(jiàn)到(Fig3).在10μm以下毛細(xì)血管壁上仍能見(jiàn)到分散呈顆粒狀陽(yáng)性終末，局部可見(jiàn)色較淡之網(wǎng)狀纖維分布.在毛細(xì)血管分叉處環(huán)繞該處之陽(yáng)性纖維更為顯著(Fig4).2.2NPY陽(yáng)性纖維和終末的分布特點(diǎn)NPY陽(yáng)性纖維和終末密集分布于提睪肌動(dòng)脈各級(jí)分支上，在第1級(jí)分支上陽(yáng)性纖維和終末仍以顆粒狀和串珠狀分布并呈網(wǎng)狀圍繞血管壁.在第2級(jí)動(dòng)脈和第3級(jí)動(dòng)脈，陽(yáng)性纖維和終末逐漸減少，但以網(wǎng)狀、橫行、縱行或渦旋狀分布更為顯著，在毛細(xì)血管壁上仍能見(jiàn)到陽(yáng)性

7、纖維和終末(Fig5).2.3SP’5-HT及M-ENK陽(yáng)性纖維和終末的分布特點(diǎn)3種陽(yáng)性纖維和終末在提睪肌動(dòng)脈各級(jí)分支上的分布特點(diǎn)與CGRP和NPY基本相似，但陽(yáng)性產(chǎn)物數(shù)量有所減少，其形態(tài)以線(xiàn)狀、橫行和縱行更為明顯.其中M-ENK樣陽(yáng)性纖維和終末最為稀疏’在毛細(xì)血管分叉處其陽(yáng)性纖維較其他幾種性質(zhì)的更多.3討論血管生理活動(dòng)的調(diào)節(jié)包括神經(jīng)調(diào)節(jié)，體液調(diào)節(jié)和自身調(diào)節(jié).其中周?chē)窠?jīng)的調(diào)節(jié)通過(guò)交感神經(jīng)、副交感神經(jīng)、脊髓背根舒血管神經(jīng)纖維、血管活性腸肽及血管內(nèi)在神經(jīng)釋放乙酰膽鹼、腎上腺素、去甲腎上腺素、胺類(lèi)及肽

8、類(lèi)等活性物質(zhì)對(duì)血管的舒縮功能產(chǎn)生影響［2，6］.本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明.大白鼠提睪肌血管各級(jí)分支均有CGRP’NPY’SP’5-HT及M-ENk免疫陽(yáng)性纖維和終末分布.根據(jù)NPY與去甲腎上腺素(norepinephrine’NE)免疫陽(yáng)性纖維分布區(qū)相同，認(rèn)為NPY是交感性的，但目前對(duì)這些活性物質(zhì)來(lái)自交感神經(jīng)還是副交感性的還不清楚，不過(guò)可以推測(cè)，血管的生理活動(dòng)是在多種神經(jīng)活性物質(zhì)、體液活性物質(zhì)及自身調(diào)節(jié)等因素共同作用下的結(jié)果，本實(shí)驗(yàn)中的幾種神經(jīng)活性物質(zhì)在提睪肌動(dòng)脈生理活動(dòng)的調(diào)節(jié)中可能起重要作