資源描述:
《酶聯(lián)免疫法與膠體金法結(jié)合判斷hbsag準確性的探》由會員上傳分享,免費在線閱讀,更多相關(guān)內(nèi)容在工程資料-天天文庫。
1、酶聯(lián)免疫法與膠體金法結(jié)合判斷HBsAg準確性的探【關(guān)鍵詞】酶免疫測定膠體金肝炎表面抗原乙型現(xiàn)在乙型肝炎表面抗原(HBsAg)的檢測已經(jīng)非常普遍,但由于受檢測方法的限制和乙肝感染的病程及標本的采集、操作等因素的影響,經(jīng)常出現(xiàn)HBsAg檢測的假陽性和假陰性現(xiàn)象[1]。目前HBsAg的檢測方法臨床實驗室中多采用膠體金法(GIA)和酶聯(lián)免疫法(EIA)。為提高檢測的準確性,筆者對HBsAg的檢測方案作了探討,通過近一年的實踐總結(jié),酶聯(lián)免疫試劑與膠體金試劑相結(jié)合對檢測HBsAg的準確性大有提高,幾乎避免了假陽性和假陰性的發(fā)生,現(xiàn)報告如下: 1材料與方法 1.1標本于2006年1~12月我
2、院住院和門診病人送檢的HBsAg和乙肝兩對半血液標本,不抗凝,保證正確處理血液標本得到待檢血清,共計5819份?! ?.2試劑 ?、倜嘎?lián)免疫試劑盒:科華、新創(chuàng)生產(chǎn)(選用年報批量前3名的試劑);②膠體金試劑:新創(chuàng)生產(chǎn)(通過對比幾個廠家,選用靈敏度最好的);③HBsAg確認試劑:雅培(Murex)公司生產(chǎn);所有試劑均按說明書進行操作。 1.3儀器 酶標儀:芬蘭MK-3雷勃酶標儀;洗板機:科華ST-36W洗板機 1.4方法 所有初檢標本先選用一個廠家的酶聯(lián)免疫試劑檢測,以酶標儀讀數(shù)為準,按S/C.O.分類:①S/C.O.>1的標本即EIA法陽性者,再用膠體金試劑測試,若亦為陽性者
3、即報告陽性;若為陰性者,則再用兩種酶聯(lián)免疫試劑做雙孔復檢,兩種試劑均重復為陽性者則報告陽性;反之,建議做中和確認試驗或PCR檢測HBV-DNA來報結(jié)果。②對于S/C.O.介于0.5~1的標本,再用兩種酶聯(lián)免疫試劑做雙孔復檢,兩種試劑均重復為陽性者則報告陽性;反之,建議做中和確認試驗或PCR檢測HBV-DNA來報結(jié)果。③對于S/C.O.<0.5的標本直接報告為陰性。 1.5其他 如果受檢者須在極短的時間內(nèi)得到檢測結(jié)果或標本出現(xiàn)嚴重溶血、脂血等狀態(tài)而無法重新采集時,則直接選用膠體金試劑進行檢測。在檢測結(jié)果中必須注明檢測方法為GIA,必要時通知重新采樣再用酶聯(lián)免疫試劑復檢?! ?結(jié)果
4、 2.1酶聯(lián)免疫試劑初檢5819份標本,其中S/C.O.>1為陽性者426份;S/C.O.介于0.5~1者28份;S/C.O.<0.5為陰性者5365份?! ?.2對S/C.O.>1為陽性者426份再次用膠體金試劑全部重復檢測,重復陽性者有411份直接報告陽性,還有15份為陰性者?! ?.3對以上S/C.O.介于0.5~1者28份和酶聯(lián)免疫試劑陽性而膠體金試劑陰性者15份共計43份,再用兩種酶聯(lián)免疫試劑做雙孔復檢?! ?.4再同時用HBsAg中和確認試劑復檢。結(jié)果見表1。表1EIA與GIA檢測結(jié)果(略) 3討論盡管EIA的靈敏度和特異性比較高,但影響酶聯(lián)免疫試劑檢測結(jié)果的因素較
5、多,如:血液樣本的處理、加樣操作、溫育洗板、比色判讀、質(zhì)控的好壞、試劑盒的質(zhì)量直接決定了結(jié)果的準確性,也就是說檢測過程中偶然誤差出現(xiàn)機率較大,在此不做討論;通過采用敏感性和特異性均低于EIA的GIA復檢,其偶然誤差大大低于EIA,相互結(jié)合、優(yōu)勢互補,經(jīng)濟、快速、準確[2]。有資料證明[3],在我國的乙型肝炎病毒感染人群中,有一部分血清HBsAg呈低水平狀態(tài)存在,HBsAg蛋白的決定簇結(jié)構(gòu)突變,造成不同的HBsAg試劑對突變株的檢測能力不同,這些不同可能造成不一致的檢測結(jié)果;血液中某些因子或藥物的干擾,造成標本出現(xiàn)用酶聯(lián)免疫試劑檢測S/C.O.值介于0.5~1之間,及酶聯(lián)免疫試劑陽性
6、而膠體金試劑陰性者。對于用酶聯(lián)免疫試劑檢測S/C.O.值介于0.5~1之間的標本,及酶聯(lián)免疫試劑陽性而膠體金試劑陰性者,通過兩種酶聯(lián)免疫試劑盒的雙孔復檢核對,HBsAg檢測的準確性大大提高[4]。對于一些疑難特殊的標本可作HBsAg中和確認試劑得到可靠結(jié)果。在本觀察中,S/C.O.介于0.5~1者28份,雙孔復檢和中和確認均檢出2份陽性;酶聯(lián)免疫試劑陽性而膠體金試劑陰性者15份,雙孔復檢出11份陽性,中和確認結(jié)果10份陽性,二者檢測結(jié)果基本相符。兩者聯(lián)合,使檢測結(jié)果的準確度大為提高,值得在臨床推廣。【