磁珠濃縮法與酶聯(lián)免疫法檢測hbsag比較與應(yīng)用

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1、磁珠濃縮法與酶聯(lián)免疫法檢測HBsAg比較與應(yīng)用唐勁松(東莞市大朗醫(yī)院檢驗(yàn)科523770)【摘要】目的比較磁珠濃縮法與酶聯(lián)免疫法(EUSA)檢測HBsAg靈敏度和陽性檢出率，選用較好的方法用于低濃HBsAg的測定。方法EUSA檢測HBsAg為強(qiáng)陽性的血清標(biāo)木40份，混合為HBsAg強(qiáng)陽性混合血清，用化學(xué)發(fā)光法檢測HBsAg全陰性血清稀釋成46例濃度不同的HBsAg陽性血清，然后分別用磁珠濃縮法、酶聯(lián)免疫法和化學(xué)發(fā)光法檢測。結(jié)果磁珠濃縮法檢測46份標(biāo)木陽性例數(shù)42例，最低檢出濃度0.1IU/mL,EUSA檢岀陽性標(biāo)木33例，最低檢出濃度0.5IU/mL,磁珠濃縮法靈敏度和檢出率明顯高于EUSA(

2、P<0.01)。結(jié)論磁珠濃縮法可明顯提高EUSA檢測HBsAg的靈敏度和陽性檢出率，只有一定的研究意義。【關(guān)鍵詞】HBsAg靈敏度磁珠濃縮法【中圖分類號】R446【文獻(xiàn)標(biāo)識碼】A【文章編號】2095-1752(2013)34-0208-02乙型肝炎病毒(HBV)感染簡稱乙肝，是一種嚴(yán)重危害人類健康的疾病，在我國感染率相當(dāng)高。乙型肝炎表面抗原(HBsAg)是乙肝診斷及治療評估中非常重要的血清學(xué)標(biāo)志物。研究表明，低濃度HBsAg人群在我國占有不小比例(占HBsAg陽性人群22.01%)[1]。如果漏檢，可能導(dǎo)致HBV通過手術(shù)、輸血、母嬰垂直等途徑傳播。有效檢測低濃度HBsAg,具有重要的臨

3、床和流行病學(xué)意義。木文釆用磁珠濃縮法和酶聯(lián)免疫法(EUSA)檢測不同濃度HBsAg陽性標(biāo)木，比較兩種方法靈敏度和陽性檢出率，旨在為低濃度HBsAg血清提供敏感、實(shí)用的檢測方法。1材料與方法1.1材料1.1.1標(biāo)木來源收集2012年期間在木醫(yī)院接受抗病毒治療的乙型肝炎患者，經(jīng)EUSA檢測HBsAg為強(qiáng)陽性的血清標(biāo)木40份，混合為HBsAg強(qiáng)陽性混合血清,用經(jīng)化學(xué)發(fā)光法檢測乙型肝炎標(biāo)志物全陰性血清稀釋成46例濃度不同的HBsAg陽性血清。1.1.2儀器和試劑羧基磁珠和磁分離架由上海奧潤微納新材料科技冇限公司和無錫中德捫爾生物技術(shù)有限公司提供，HBsAgEUSA試劑盒由廈門英科（新創(chuàng)）生物右限公司

4、提供。酶標(biāo)儀為法國Mutiskan-MK3,美國W克曼DXI-600全自動化學(xué)發(fā)光免疫分析儀和配套試劑。1.2方法分別用磁珠濃縮法［2］、酶聯(lián)免疫法和化學(xué)發(fā)光法檢測46例濃度不同的HBsAg陽性血清，酶標(biāo)儀測定HBsAg的吸光度值，并計(jì)算S/CO值（吸光度值與臨界值的比值）。當(dāng)S/CO值≥l吋，結(jié)果為陽性；S/CO值<l時，結(jié)果為陰性［3】。1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)分析采用SPSSI3.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，P<0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。2結(jié)果磁珠濃縮法檢測46份標(biāo)本陽性例數(shù)42例，最低檢出濃度O.：UU/mL,ELISA檢出陽性標(biāo)本33例，最低檢出濃度0.5IU/mL靈敏度和檢

5、出率明顯高于與ELISA（P<0.01）,見表1。表1三種方法測定HBsAg結(jié)果比較3討論我國是一個乙肝高發(fā)國家，HBV感染的診斷工作對乙肝的防治工作奮重大意義。目前一般認(rèn)為HBsAg陽性是HBV感染的標(biāo)志，乙肝兩對半作為HBV感染最常用的檢測，在我國各級醫(yī)院廣泛開展。0前我國檢測乙肝兩對半的方法主要奮金標(biāo)法、酶免法、化學(xué)發(fā)光法和電化學(xué)發(fā)光法，艽中酶免法應(yīng)用最廣泛。在高濃度HBsAg標(biāo)本中，上述檢測方法區(qū)別不大，但是在低濃度HBsAg標(biāo)本中，各種方法檢測結(jié)果可能不同。在乙型肝炎病毒感染的“窗U期”、急性期后或恢復(fù)期、自限性感染末期的攜帶者等情況下人體內(nèi)會出現(xiàn)低濃度的HBsAg。低濃度H

6、BsAg的患者體內(nèi)可能存在著肝臟的持續(xù)性損傷和病毒復(fù)制，一旦發(fā)生漏檢就會嚴(yán)重影響臨床診治和輸血安全，應(yīng)該引起高度重視[4]。采用微粒子酶免疫技術(shù)(MEIA)代替?zhèn)鹘y(tǒng)的酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA),低濃度HBsAg的檢出率得到顯著提高。MEIA法雖然具有重復(fù)性好，安全封閉，操作不易被污染的優(yōu)點(diǎn)，但由于需要大型儀器，成本較高，基層醫(yī)院很難普及，檢測費(fèi)用也比較高，不為大多數(shù)患者承受，有一定的局限性。EUSA法操作簡便快速，試劑成本低，適用于大批量人群的篩査試驗(yàn)，對高濃度HBsAg檢測可與某些先進(jìn)技術(shù)相媲美,但是靈敏度比較低,對低濃度HBsA易漏診。如何比較奮效和經(jīng)濟(jì)的提高ELISA檢測HBsAg

7、的靈敏度是研宄的重點(diǎn)。磁珠(MagneticBeads)是一種由磁性材料和非磁性聚合物材料復(fù)合而成的新型功能微球。磁珠己廣泛應(yīng)用于蛋白質(zhì)的分離提純、細(xì)胞分離、酶的固定以及免疫分析等多個領(lǐng)域。磁珠提取蛋白質(zhì)與磁珠表面基團(tuán)有關(guān)，在特定的鹽離子和pH環(huán)境下，可以與蛋白質(zhì)進(jìn)行結(jié)合與解離[5]。Satoh等[3】使用磁珠濃縮處理標(biāo)本后，其HBsAg濃縮水平提高了4?7倍。本文采用市場上廣泛生產(chǎn)的羧基磁珠吸附血源性HBs