酶聯(lián)免疫法與膠體金法結(jié)合判斷hbsag準(zhǔn)確性的探討

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時間:2018-05-03

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1、酶聯(lián)免疫法與膠體金法結(jié)合判斷HBsAg準(zhǔn)確性的探討【關(guān)鍵詞】酶免疫測定膠體金肝炎表面抗原乙型現(xiàn)在乙型肝炎表面抗原(HBsAg)的檢測已經(jīng)非常普遍,但由于受檢測方法的限制和乙肝感染的病程及標(biāo)本的采集、操作等因素的影響,經(jīng)常出現(xiàn)HBsAg檢測的假陽性和假陰性現(xiàn)象[1]。目前HBsAg的檢測方法臨床實驗室中多采用膠體金法(GIA)和酶聯(lián)免疫法(EiA)。為提高檢測的準(zhǔn)確性,筆者對HBsAg的檢測方案作了探討,通過近一年的實踐總結(jié),酶聯(lián)免疫試劑與膠體金試劑相結(jié)合對檢測HBsAg的準(zhǔn)確性大有提高,幾乎避免了

2、假陽性和假陰性的發(fā)生,現(xiàn)報告如下:  1材料與方法  1.1標(biāo)本來源于2006年1~12月我院住院和門診病人送檢的HBsAg和乙肝兩對半血液標(biāo)本,不抗凝,保證正確處理血液標(biāo)本得到待檢血清,共計5819份?! ?.2試劑 ?、倜嘎?lián)免疫試劑盒:科華、新創(chuàng)生產(chǎn)(選用年報批量前3名的試劑);②膠體金試劑:新創(chuàng)生產(chǎn)(通過對比幾個廠家,選用靈敏度最好的);③HBsAg確認(rèn)試劑:雅培(Murex)公司生產(chǎn);所有試劑均按說明書進(jìn)行操作。  1.3儀器  酶標(biāo)儀:芬蘭MK-3雷勃酶標(biāo)儀;洗板機(jī):科華ST-36W洗板

3、機(jī)  1.4方法  所有初檢標(biāo)本先選用一個廠家的酶聯(lián)免疫試劑檢測,以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn),按S/C.O.分類:①S/C.O.>1的標(biāo)本即EIA法陽性者,再用膠體金試劑測試,若亦為陽性者即報告陽性;若為陰性者,則再用兩種酶聯(lián)免疫試劑做雙孔復(fù)檢,兩種試劑均重復(fù)為陽性者則報告陽性;反之,建議做中和確認(rèn)試驗或PCR檢測HBV-DNA來報結(jié)果。②對于S/C.O.介于0.5~1的標(biāo)本,再用兩種酶聯(lián)免疫試劑做雙孔復(fù)檢,兩種試劑均重復(fù)為陽性者則報告陽性;反之,建議做中和確認(rèn)試驗或PCR檢測HBV-DNA來報結(jié)果。③對于

4、S/C.O.<0.5的標(biāo)本直接報告為陰性?! ?.5其他  如果受檢者須在極短的時間內(nèi)得到檢測結(jié)果或標(biāo)本出現(xiàn)嚴(yán)重溶血、脂血等狀態(tài)而無法重新采集時,則直接選用膠體金試劑進(jìn)行檢測。在檢測結(jié)果中必須注明檢測方法為GIA,必要時通知重新采樣再用酶聯(lián)免疫試劑復(fù)檢。  2結(jié)果  2.1酶聯(lián)免疫試劑初檢5819份標(biāo)本,其中S/C.O.>1為陽性者426份;S/C.O.介于0.5~1者28份;S/C.O.<0.5為陰性者5365份?! ?.2對S/C.O.>1為陽性者426份再次用膠體金試劑全部重復(fù)檢測,重復(fù)陽性

5、者有411份直接報告陽性,還有15份為陰性者?! ?.3對以上S/C.O.介于0.5~1者28份和酶聯(lián)免疫試劑陽性而膠體金試劑陰性者15份共計43份,再用兩種酶聯(lián)免疫試劑做雙孔復(fù)檢?! ?.4再同時用HBsAg中和確認(rèn)試劑復(fù)檢。結(jié)果見表1。表1EiA與GIA檢測結(jié)果(略)  3討論盡管EIA的靈敏度和特異性比較高,但影響酶聯(lián)免疫試劑檢測結(jié)果的因素較多,如:血液樣本的處理、加樣操作、溫育洗板、比色判讀、質(zhì)控的好壞、試劑盒的質(zhì)量直接決定了結(jié)果的準(zhǔn)確性,也就是說檢測過程中偶然誤差出現(xiàn)機(jī)率較大,在此不做討

6、論;通過采用敏感性和特異性均低于EIA的GIA復(fù)檢,其偶然誤差大大低于EIA,相互結(jié)合、優(yōu)勢互補(bǔ),經(jīng)濟(jì)、快速、準(zhǔn)確[2]。有資料證明[3],在我國的乙型肝炎病毒感染人群中,有一部分血清HBsAg呈低水平狀態(tài)存在,HBsAg蛋白的決定簇結(jié)構(gòu)突變,造成不同的HBsAg試劑對突變株的檢測能力不同,這些不同可能造成不一致的檢測結(jié)果;血液中某些因子或藥物的干擾,造成標(biāo)本出現(xiàn)用酶聯(lián)免疫試劑檢測S/C.O.值介于0.5~1之間,及酶聯(lián)免疫試劑陽性而膠體金試劑陰性者。對于用酶聯(lián)免疫試劑檢測S/C.O.值介于0.5

7、~1之間的標(biāo)本,及酶聯(lián)免疫試劑陽性而膠體金試劑陰性者,通過兩種酶聯(lián)免疫試劑盒的雙孔復(fù)檢核對,HBsAg檢測的準(zhǔn)確性大大提高[4]。對于一些疑難特殊的標(biāo)本可作HBsAg中和確認(rèn)試劑得到可靠結(jié)果。在本觀察中,S/C.O.介于0.5~1者28份,雙孔復(fù)檢和中和確認(rèn)均檢出2份陽性;酶聯(lián)免疫試劑陽性而膠體金試劑陰性者15份,雙孔復(fù)檢出11份陽性,中和確認(rèn)結(jié)果10份陽性,二者檢測結(jié)果基本相符。兩者聯(lián)合,使檢測結(jié)果的準(zhǔn)確度大為提高,值得在臨床推廣?!緟⒖?/p>

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