內(nèi)皮抑素的低分子肝素修飾及對兔角膜新生血管的抑制

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1、內(nèi)皮抑素的低分子肝素修飾及對兔角膜新生血管的抑制【摘要】目的探討利用低分子肝素對內(nèi)皮抑素進(jìn)行結(jié)構(gòu)修飾，并評價其對角膜新生血管(cornealneovascularization，V)的抑制作用。方法采用化學(xué)方法用低分子肝素修飾內(nèi)皮抑素，堿燒傷法建立兔角膜新生血管模型，分別在球結(jié)膜下注射低分子肝素化內(nèi)皮抑素（Ⅰ組）、內(nèi)皮抑素（Ⅱ組）和生理鹽水（對照組），觀察新生血管的生長情況。結(jié)果成功的利用低分子肝素對內(nèi)皮抑素進(jìn)行了結(jié)構(gòu)修飾，動物實(shí)驗(yàn)表明Ⅰ組新生血管的長度、面積、數(shù)量、VEGF的表達(dá)均明顯低于其它兩組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。結(jié)論低分子肝素化內(nèi)皮

2、抑素可有效抑制角膜新生血管的生長，效果優(yōu)于內(nèi)皮抑素?！娟P(guān)鍵詞】低分子肝素內(nèi)皮抑素修飾角膜新生血管兔itsangiogenesiseffectsonrabbitcorneasAbstract:ObjectiveToinvestigatethemodificationofendostatin(ES)olecularodifiedicalmethod.TherabbitVmodeladealsaline(controlgroup)alleringroup1thanintheothertolecularg，中國煙臺東誠生化有限公司）；健康成年新西蘭白兔30只（山東大學(xué)

3、動物實(shí)驗(yàn)中心），體重2.02.5?kg，雌雄兼有，眼部無異常。1.2方法1.2.1LMm)分別為1.32±0.18、1.77±0.27、2.32±0.58,平均面積(mm2)為4.33±1.21、5.84±1.27、7.52±1.35,治療組與對照組相比以及兩治療組間相比差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。堿燒傷后第13天的新生血管生長情況見彩圖79。VEGF免疫組化結(jié)果為：對照組在角膜全基質(zhì)層內(nèi)有炎性細(xì)胞浸潤，在炎性細(xì)胞胞漿可見VEGF表達(dá)呈；Ⅰ組在角膜前1/3基質(zhì)層內(nèi)有炎性細(xì)胞浸潤，在炎性細(xì)胞胞漿可見VEGF表達(dá)呈＋；Ⅱ組在角膜前1/2基質(zhì)層內(nèi)有炎

4、性細(xì)胞浸潤，在炎性細(xì)胞胞漿可見VEGF表達(dá)呈。圖像分析顯示Ⅰ組、Ⅱ組與對照組VEGF含量（灰度值）依次為102.35±18.56、125.46±21.43、152.05±25.24，治療組與對照組相比及兩治療組間相比VEGF表達(dá)均明顯減少（P<0.05）。新生血管形態(tài)和數(shù)量觀察的結(jié)果：對照組在角膜全基質(zhì)層內(nèi)可見大量成熟的新生血管，管壁薄、管腔大、排列紊亂；Ⅰ組淺基質(zhì)層內(nèi)可見少量新生毛細(xì)血管，管腔較小，分布??；Ⅱ組新生血管介于兩者之間。Ⅰ組、Ⅱ組、對照組的新生血管數(shù)量（個/400倍視野）分別為1.05±0.84、3.56±1.85、6.22±2.79，

5、治療組與對照組相比及兩治療組間相比差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。3討論ES是1997年于小鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞瘤的培養(yǎng)上清中發(fā)現(xiàn)的，后證實(shí)是由體內(nèi)XVIII型膠原在組織蛋白酶或金屬蛋白酶作用下，其羧基末段被分解出的一段大小為20?kD的片段［1］。ES是目前公認(rèn)的最強(qiáng)的新生血管抑制劑，可以特異性作用于血管內(nèi)皮細(xì)胞，抑制其增殖和移行，從而抑制新生血管生長。近年來多肽、蛋白質(zhì)作為藥物，已越來越多地應(yīng)用于臨床。但是蛋白質(zhì)具有抗原性，且有的蛋白質(zhì)由于在體內(nèi)半衰期短、生物利用度低而達(dá)不到治療作用。化學(xué)修飾能夠賦予蛋白質(zhì)和多肽類藥物許多優(yōu)良性能，如免疫原性降低或消失，

6、毒副作用減少，半衰期延長，物理、化學(xué)和生物穩(wěn)定性增強(qiáng)等?；趦?nèi)皮抑素的作用機(jī)制及肝素的生物學(xué)特性，內(nèi)皮抑素既對內(nèi)皮細(xì)胞有親和作用又具有肝素的特異性結(jié)合位點(diǎn)［5］，故本研究采用LMS,BoehmT,FolkmanJ,etal.Endostatin:anendogenousinhibitorofangiognesisandtumorgrootoneuronexcitation［J］.BrainRes,1979,169:1127.［3］FengJ,CaiX,ZhaoJH,etal.SerotoninreceptorsmodulateCABAAreceptorcha

7、nnelsthroughactivationofanchoredproteinkinaseCinprefrontalcortical［J］.JNeurosci,2001,21（17）:6502.［4］王曉燕，孫汶生，馬春紅，等.重組人分泌型endostatin的純化及其抑癌活性探討［J］.中國腫瘤臨床，2003,30（2）：136139.［5］KreugerJ,MatsumotoT,VaneerschM,etal.Roleofheparansulfatedomainorganizationinendostatininhibitionofendothelial

8、cellfunction［J］.EMB