大黃湯劑蒽醌類成分測(cè)定及其在顱腦損傷中的應(yīng)用

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1、大黃湯劑蒽醌類成分測(cè)定及其在顱腦損傷中的應(yīng)用于宗光山東省即墨市第二人民醫(yī)院神經(jīng)外科，山東即墨266214[摘要]目的探討大黃湯劑蒽醌類成分測(cè)定方法及其在顱腦損傷中的應(yīng)用。方法通過(guò)使用超高效液相色譜方法對(duì)大黃湯劑中的蒽醌類藥物成分進(jìn)行測(cè)定。選取我院70例創(chuàng)傷性顱腦損傷患者在通過(guò)鼻飼大黃湯劑后實(shí)施腰椎穿刺手術(shù)，采用以上方法對(duì)患者的腦脊液進(jìn)行檢測(cè)。然后把檢測(cè)出的蒽醌類成分在動(dòng)物中進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，使用20只實(shí)驗(yàn)鼠進(jìn)行對(duì)比治療。實(shí)驗(yàn)鼠分為治療組和對(duì)照組，治療組實(shí)驗(yàn)鼠給予大黃素甲醚灌胃，對(duì)照組給予生理鹽水灌胃。灌胃24h后取

2、上實(shí)驗(yàn)鼠腦皮質(zhì)，通過(guò)經(jīng)胺法檢測(cè)大鼠腦皮質(zhì)SOD活力。結(jié)果70例創(chuàng)傷顱腦損傷病人鼻飼大黃湯劑后腦脊液中有大黃有效蒽醌類成分為大黃素甲醚。通過(guò)動(dòng)物對(duì)該成分進(jìn)行實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)兩組大鼠的SOD活力有顯著差異，治療組大鼠腦皮質(zhì)的SOD活力要明顯高于對(duì)照組（t=5.640,P=0.012）。結(jié)論大黃湯劑中的大黃素甲醚可能為大黃抗顱腦損傷的有效成分，且能夠提高顱腦損傷大鼠腦組織中的SOD活力。[.jyqkm,1.6um，色譜柱溫控制在四十?dāng)z氏度，探測(cè)波長(zhǎng)控制在255納米，進(jìn)樣量為4uL[4]。試品溶液的制備：為了確保定量的準(zhǔn)

3、確性，通過(guò)量杯進(jìn)行定量，取30g的生大黃，處理干凈后研磨成粉末在蒸餾水中浸泡半個(gè)小時(shí)，然后煎煮沸騰20min。待其冷卻之后加以過(guò)濾，文火上濃縮成含有大黃生藥的藥液。對(duì)照品溶液的制備：精密稱定適量的番瀉苷A、B，蘆薈大黃素、大黃素等，使用甲醇溶解定容到30mL的瓶中進(jìn)行數(shù)分鐘的搖勻。搖勻后可得一定濃度的溶液，分別取溶液對(duì)照品放入20mL的瓶中，并且加入些許甲醇進(jìn)行稀釋到刻度。標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備：精密吸取一定量的對(duì)照溶液，同時(shí)加入甲醇進(jìn)行稀釋制成標(biāo)準(zhǔn)品溶液，根據(jù)以上的色譜條件對(duì)各樣3uL測(cè)定。1.2.2實(shí)驗(yàn)鼠大黃素

4、甲醚抗氧測(cè)定材料與儀器：取SOD試劑盒，常州萬(wàn)泰有限公司的電子分析天平，北京優(yōu)尼康生物公司的微量勻漿儀[5]。試驗(yàn)方法：20只大鼠，雌雄大鼠分別10只，大鼠年齡為3~5個(gè)月，重量為260~320g。兩組大鼠經(jīng)過(guò)麻醉后俯臥于手術(shù)臺(tái)，對(duì)其左腦進(jìn)行開(kāi)顱手術(shù)，在前臼后側(cè)的1.5mm，左側(cè)2mm處開(kāi)骨窗，直徑為0.6里面。使用重錘對(duì)骨窗進(jìn)行自由落體的沖擊，沖擊力控制在1000g.cm，然后使用骨蠟封閉大鼠骨窗。大鼠蘇醒后對(duì)對(duì)照組進(jìn)行生理鹽水灌胃，治療組使用大黃素加密灌胃，灌量保持一致。腦組織超氧化物測(cè)定：灌胃后的24

5、h在對(duì)大鼠麻醉后處死，取大鼠頭部進(jìn)行清洗，去除血液使用濾紙拭干并且進(jìn)行稱重，取200mg的腦皮層組織當(dāng)放入2mL的勻漿介質(zhì)中，然后使用勻漿器進(jìn)行勻漿，取上清液測(cè)定器SOD活性。1.3納入標(biāo)準(zhǔn)對(duì)顱腦損失患者的納入標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定如下：有昏迷史和顱腦外傷史；使用昏迷量表進(jìn)行測(cè)定時(shí)評(píng)分應(yīng)該低于8分；年齡處于14~55歲之間；昏迷時(shí)間在3~14d內(nèi)，且患者的體征正常。排除標(biāo)準(zhǔn)為：具有顱腦原法性疾病的患者；有嚴(yán)重的不可逆性腦干損害；出現(xiàn)嚴(yán)重的合并損傷；入院后1d后死亡。1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法實(shí)驗(yàn)計(jì)量數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示

6、,多組間計(jì)量資料比較用one—ayANOVA方法分析,兩組間計(jì)量資料比較采用student—t檢驗(yàn),均采用統(tǒng)計(jì)軟件SPSS15.0處理[6]。2結(jié)果70例創(chuàng)傷顱腦損傷病人鼻飼大黃湯劑后腦脊液中有大黃有效蒽醌類成分為大黃素甲醚。通過(guò)動(dòng)物對(duì)該成分進(jìn)行實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)治療組大鼠腦皮質(zhì)的SOD活力要明顯高于對(duì)照組。大黃湯劑蒽醌類成分測(cè)定結(jié)果：大黃湯劑中的各個(gè)成分的相關(guān)系數(shù)都高于0.99，可見(jiàn)其標(biāo)準(zhǔn)曲線性較好；且大黃湯劑中含有蒽醌類成分測(cè)定結(jié)果的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差在3%~5%以內(nèi)。其中番瀉苷B濃度為（4.49±0.20），A濃度

7、為（12.81±0.70），大黃素質(zhì)量濃度為（9.79±0.30），大黃素甲醚質(zhì)量濃度為（5.41±0.32）。實(shí)驗(yàn)組測(cè)定結(jié)果：對(duì)照組大鼠腦皮質(zhì)SOD活力為（19.92±1.07）U/mgProt,治療組大鼠腦皮質(zhì)SOD活力為（22.76±2.83）U/mgProt,兩組大鼠的SOD活力有顯著差異，（t=5.640,P=0.012）。3討論通過(guò)本次研究確定了創(chuàng)傷顱腦損傷病人鼻飼大黃湯劑后腦脊液中有大黃有效蒽醌類成分為大黃素甲醚，且大黃湯劑中的各個(gè)成分的相關(guān)系數(shù)都高于0.99。且在對(duì)兩組實(shí)驗(yàn)鼠進(jìn)行對(duì)比研究后得

8、出給予大黃素甲醚灌胃的老鼠的大腦皮質(zhì)的SOD活力要比給予生理鹽水灌胃組實(shí)驗(yàn)組的大腦皮質(zhì)的SOD活力要高，兩者相差在（5.1±1.75）U/mgProt左右。研究結(jié)果證明了通過(guò)采用高效液相色譜方法對(duì)大黃湯劑蒽醌類成分進(jìn)行測(cè)定能夠檢測(cè)出顱腦損傷患者的腦脊液中有大黃素甲醚成分，同時(shí)也證明了這一種成分具有的抗氧化作用[7]。目前，臨床上對(duì)大黃湯劑成分的測(cè)定研究并不多，而作為臨床上患者直接服用的一個(gè)藥劑，對(duì)其的測(cè)量是確保其