p27mt基因?qū)Υ竽c癌lovo細(xì)胞粘附作用的影響

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1、p27mt基因?qū)Υ竽c癌Lovo細(xì)胞粘附作用的影響【摘要】目的研究人突變p27基因(p27mt)對(duì)大腸癌Lovo細(xì)胞粘附作用的影響,探討p27mt基因在大腸癌Lovo細(xì)胞轉(zhuǎn)移中的作用機(jī)制。方法用Adp27mt轉(zhuǎn)染大腸癌Lovo細(xì)胞,采用TT法檢測(cè)p27mt基因?qū)Υ竽c癌Lovo細(xì)胞同質(zhì)粘附、異質(zhì)粘附作用的影響。結(jié)果Adp27mt轉(zhuǎn)染Lovo細(xì)胞后,同質(zhì)粘附作用高于AdLacZ組和對(duì)照組,異質(zhì)粘附作用低于AdLacZ組和對(duì)照組。結(jié)論上調(diào)p27mt基因的表達(dá),可使大腸癌細(xì)胞間的同質(zhì)粘附作用增強(qiáng),異質(zhì)粘附作用降低,因此,p27mt基因具有抑制大腸癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移的功能,其機(jī)制是改變了細(xì)胞基質(zhì)及

2、細(xì)胞間的粘附能力?!娟P(guān)鍵詞】p27mt基因;大腸癌Lovo細(xì)胞;同質(zhì)粘附;異質(zhì)粘附基金項(xiàng)目:十堰市科技局資助項(xiàng)目(2005ZD036)TheAdhesionEffectofColorectalCarcinomaLovocellsbyHumanMutantp27mtGeneSONGShimao1,CHENJun21.DepartmentofOncology,AffiliatedTaihe'sHospital,AffiliatedPeople'sHospital,YunyangMedicalCollege,Shiyan442000,China;2.DepartmentofGastroen

3、terologyCorrespondingauthor:CHENJun,Email:sycjsycatv.Abstract:ObjectiveTostudytheeffectofp27mttransfectedintohumancolorectalcarcinomaLovocells,andtoexplorethemechanismofp27mtgeneonthemetastasesofcolorectalcarcinomaLovocells.MethodsTheexpressionofp27mtonthep27mttransfectedLovocellsinedp27mtprot

4、EinexpressiontgeneonthehomogenEItyadhesionofhumancolorectalcarcinomaeasuredinedbyMTTmethod.ResultsHighexpressionofp27onthep27mttransfectedLovocellogeneityadhesionofp27mttransfectedLovocellgrouptgenecanpromotehomogeneityadhesionandreduceheterogeneityadhesionofcolorectalcarcinomaLovocells.p27mtg

5、enemightfunctionasinhibitorofcolorectalcarcinomametastasis.Keytgene;ColorectalneoplasmLovocells;Homogeneityadhesion;Heterogeneityadhesionp27是一種多功能細(xì)胞周期素依賴激酶抑制因子(cyclindependentkinaseinhibitor,CDKI),其主要功能是通過阻止細(xì)胞G0/G1期至S期的轉(zhuǎn)換,實(shí)現(xiàn)對(duì)細(xì)胞周期的負(fù)性調(diào)控,對(duì)腫瘤細(xì)胞有明顯的生長抑制和促凋亡作用[1]。本研究旨在探討人突變p27(p27mt)基因在大腸癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移過程中對(duì)腫瘤細(xì)胞

6、粘附作用的影響。1材料與方法1.1材料人大腸癌細(xì)胞株Lovo細(xì)胞購自武漢大學(xué)典型物保藏中心,人突變p27重組腺病毒(Adp27mt)由陳珺構(gòu)建[2],LacZ重組腺病毒(AdLacZ)由鄖陽醫(yī)學(xué)院臨床醫(yī)學(xué)研究所王家寧博士構(gòu)建[3],纖維粘連蛋白(FN)購于武漢大學(xué)醫(yī)學(xué)院病理教研室,RPMI1640培養(yǎng)基,四氮唑藍(lán)鹽(MTT)為Sigma公司產(chǎn)品,小牛血清購自杭州四季青生物公司。I1640培養(yǎng)液中,置37℃,5%CO2濕化培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng),在倒置顯微鏡下觀察生長情況,Lovo細(xì)胞3天傳代1次。取對(duì)數(shù)生長期細(xì)胞,經(jīng)5g/L胰蛋白酶消化,用PBS液或無血清RPMI1640培養(yǎng)液制成細(xì)胞懸液。

7、采用血細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù),臺(tái)盼藍(lán)拒染法測(cè)定細(xì)胞活力,只有細(xì)胞活力大于95%以上方可用于實(shí)驗(yàn)。1.2.2腺病毒轉(zhuǎn)染效率測(cè)定待Lovo細(xì)胞達(dá)到60%~80%融合,用AdLacZ轉(zhuǎn)染,感染復(fù)數(shù)(multiplicityofinfection,MOI)分別為20、30、40、50,繼續(xù)培養(yǎng)48h,經(jīng)5g/L戊二醛固定15min,PBS洗2次后加入Xgal染液,37℃,50ml/LCO2培養(yǎng)箱內(nèi)孵化4~24h計(jì)數(shù)藍(lán)染細(xì)胞數(shù)。1.2.3OI=50)和Ad

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