tnfα對(duì)tp酶的調(diào)節(jié)及其對(duì)5fu前體藥作用的影響

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1、TNFα對(duì)TP酶的調(diào)節(jié)及其對(duì)5FU前體藥作用的影響　　2結(jié)果　　2.1TNFα對(duì)腫瘤細(xì)胞株TP酶表達(dá)的調(diào)節(jié)大腸癌細(xì)胞株Lovo，SCF7細(xì)胞株TP酶濃度為（30.1±1.4）μg/g，耐藥株MCF7/ADR的TP酶蛋白濃度為（18.8±0.4）μg/g，低于非耐藥株（P<0.01）.當(dāng)TNFα濃度為1000kU/L時(shí)，原無TP酶表達(dá)的Lovo細(xì)胞TP酶蛋白表達(dá)水平升高到22.5μg/g，減低TNFα濃度不能使Lovo細(xì)胞中TP酶濃度上升，增加濃度Lovo細(xì)胞大量死亡.MCF

2、7細(xì)胞應(yīng)用TNFα處理后，TP酶蛋白表達(dá)水平隨著濃度的逐漸升高而增加，具有劑量依賴性.差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）.MCF/ADR細(xì)胞應(yīng)用TNFα處理后，TP酶蛋白表達(dá)水平有所升高，但上升幅度不大，也表現(xiàn)出劑量依賴性（P<0.05）.但未達(dá)到非耐藥的MCF7細(xì)胞株的TP酶蛋白表達(dá)水平（表1）.應(yīng)用200kU/L的TNFα處理MCF7細(xì)胞后隨培養(yǎng)時(shí)間延長(zhǎng)細(xì)胞TP酶蛋白表達(dá)呈上升趨勢(shì)，在48h達(dá)高峰，此后持續(xù)TP酶蛋白表達(dá)較高水平至96h（仍為起始時(shí)的1.9倍）.而MCF

3、/ADR應(yīng)用200kU/L的TNFα處理后，TP酶有所上升，但幅度較小，未達(dá)到MCF7起始水平.Lovo細(xì)胞在TNFα200kU/L作用72hTP酶蛋白仍為0（表2）.表1TNFα對(duì)腫瘤細(xì)胞中TP酶的調(diào)節(jié)（略）表2200kU/LTNFα作用不同時(shí)間后乳腺癌細(xì)胞系中TP酶的變化（略）　　2.25FU類藥物的細(xì)胞毒作用96h5FU和氟鐵龍對(duì)Lovo和MCF7的生長(zhǎng)抑制作用呈現(xiàn)明顯的劑量依賴性（圖1A）.氟鐵龍對(duì)Lovo和MCF7的IC50(mg/L)高于5FU，為5FU的7.4

4、7～40.57倍，其差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義［（31.65±1.14）vs(0.78±0.01)，(12.85±0.29)vs(1.72±0.03)，P<0.01）］.兩種藥物對(duì)Lovo和MCF7的抑制作用呈時(shí)間依賴關(guān)系，低劑量的5FU在短時(shí)間內(nèi)即產(chǎn)生生長(zhǎng)抑制作用，氟鐵龍起效時(shí)間較為緩慢（圖1B）.選擇對(duì)腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)無抑制作用的TNFα劑量（200kU/L）培養(yǎng)腫瘤細(xì)胞24，48，72h后，應(yīng)用MTT檢測(cè)MCF7細(xì)胞對(duì)5FU類藥物的敏感性無提高（P>0.05）.但能提高M(jìn)CF7對(duì)

5、氟鐵龍的敏感性.IC50在TNFα作用48h最低（表3）.表3200kU/LTNF作用時(shí)間與MCF7細(xì)胞對(duì)FU類藥物敏感性的關(guān)系（略）　　3討論　　大量資料證明，癌組織中的TP酶明顯高于癌旁正常組織［2-3］.且TP酶主要分布于腫瘤基質(zhì)，尤其是腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞，其次在腫瘤細(xì)胞.我們發(fā)現(xiàn)：大腸癌Lovo，SCF7（30.1±1.4）μg/g及其耐藥株MCF/ADR（18.8±0.4）μg/g中均檢測(cè)到TP酶，但耐藥株TP酶濃度明顯低于非耐藥株，也進(jìn)一步說明了不同腫瘤細(xì)胞之間TP酶表達(dá)水平存在

6、明顯的差異［5］.TNFα能上調(diào)腫瘤細(xì)胞MCF7，MCF/ADR中的TP酶，且表現(xiàn)出時(shí)間、劑量依賴性，其上調(diào)機(jī)制尚不十分清楚，TNF受體R2起了重要作用［6］.5′dFUrd（氟鐵龍）僅需要在腫瘤細(xì)胞中經(jīng)TP酶的一步催化作用即可轉(zhuǎn)化為有細(xì)胞毒作用的5FU.本試驗(yàn)結(jié)果顯示：氟鐵龍對(duì)Lovo細(xì)胞的IC50為（31.6±1.1）mg/g，為5FU的40.57倍，起效時(shí)間較5FU緩慢，但是臨床上確實(shí)有大量的結(jié)腸癌對(duì)氟鐵龍治療有效，由此提出，氟鐵龍對(duì)大腸癌細(xì)胞的殺傷作用可能是通過間質(zhì)細(xì)胞中的

7、TP酶作用而實(shí)現(xiàn)的，Lovo細(xì)胞對(duì)氟鐵龍不敏感的原因可能是由于Lovo細(xì)胞中無TP酶存在.以上結(jié)果證明了TP酶在5FU前體藥物轉(zhuǎn)化過程中的重要性.　　本結(jié)果還表明TNFα作用后的Lovo細(xì)胞對(duì)5FU和氟鐵龍的敏感性并沒有提高.而TNFα200kU/L作用于MCF7細(xì)胞后，MCF7對(duì)氟鐵龍的敏感性卻有明顯提高，而對(duì)5FU的化療敏感性影響不大.實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)可以看出，TP酶活性提高1.27倍，MCF7對(duì)氟鐵龍的敏感性提高了1.34倍.我們也發(fā)現(xiàn)，TNFα增強(qiáng)氟鐵龍的抗癌活性并不滿意，上調(diào)

8、后的IC50仍然高于直接應(yīng)用5FU.由于本實(shí)驗(yàn)是體外實(shí)驗(yàn)，推測(cè)應(yīng)用于動(dòng)物模型或人體后由于腫瘤間質(zhì)細(xì)胞、腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞中TP酶的作用，可能會(huì)進(jìn)一步增加氟鐵龍的敏感性.TNFα具有殺傷或抑制腫瘤細(xì)胞和多種免疫調(diào)節(jié)功能，但是由于副作用較大，為TNFα的臨床應(yīng)用造成困難.如果將TNFα作為一種增效劑，小劑量應(yīng)用，副作用將減少.某些抗腫瘤藥物與TNFα聯(lián)合應(yīng)用，既可減少各種藥物的用量、降低毒副作用，又可提高療效，不失為腫瘤治療的一種可行方法.【參考