tnfα對tp酶的調節(jié)及其對5fu前體藥作用

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1、TNFα對TP酶的調節(jié)及其對5FU前體藥作用【摘要】目的：探討TNFα對胸苷磷酸化酶（TP酶）的調節(jié)及其與5FU前體藥化療敏感性的關系.方法：應用TNFα誘導腫瘤細胞中的TP酶，ELISA法檢測腫瘤組織中TP酶蛋白水平，采用MTT法檢測藥物敏感性變化.結果：大腸癌細胞株Lovo和SCF7中的TP酶含量為（30.1±1.4）μg/g，高于MCF/ADR的TP酶（18.8±0.4）μg/g.TNFα上調MCF7和MCF/ADR中TP酶表達呈時間和劑量依賴性.耐藥株MCF/ADR中TP酶上調高達（28.4±1.2）μg

2、/g，未達非耐藥細胞株水平.MCF7細胞中TP酶上調1.27倍，對氟鐵龍的IC50降低了1.33倍，有統(tǒng)計學意義.結論：TNFα能劑量時間依賴性上調腫瘤細胞的TP酶，TNFα為5FU前體藥化療增效.【關鍵詞】胸苷磷酸化酶；氟尿嘧啶；氟尿苷；卡培他濱；腫瘤壞死因子α　　【Abstract】AIM：ToexploretheregulativeactionofTNFαonthymidinephosphorylase(TP)anditseffectonthesensitivityofprodrugto5fluoroura

3、cil(5FU)incancercelllines.METHODS：TheTPleveloftumorcellsearsuredbyELISA.AndthentheMTTassayallconcentrationofTNFα.RESULTS：TheTPinLovoorSCF7displayeda1.27foldincrease,edependentincreaseinthelevelofTPandenhancethesensitivityofMCF7to5FU.　　【Keyidinephosphorylase;flu

4、orouracil;floxuridine;capecitabine;tumornecrosisfactoralpha　　0引言　　胸苷磷酸化酶（thymidinephosphorylase，TP酶）是近年來發(fā)現(xiàn)的嘧啶核苷代謝過程中的一個關鍵酶，是5FU前體藥物（卡培他濱、脫氧氟尿苷）轉化為氟尿嘧啶的最后一個限速酶.近來一些研究表明，胸苷磷酸化酶與腫瘤的化療關系密切，它能增強患者對5氟尿嘧啶(5FU)前體藥物化療的敏感性，提高化療效果，改善腫瘤患者的預后［1］.TNFα，INFγ等多種因子能夠上調腫瘤細胞內TP酶的表

5、達.我們應用TNFα誘導結腸癌和乳腺癌細胞中TP上調并觀察其對5FU前體藥物的細胞毒作用，為指導臨床用藥提供理論依據(jù).　　1材料和方法　　1.1材料　　人結腸癌細胞株Lovo和SCF7和MCF7/ADR由天津腫瘤醫(yī)院中心實驗室保存.RPMI1640培養(yǎng)液、胎牛血清購自Gibco公司，MTT和DMSO為Sigma公司產(chǎn)品.氟鐵龍為上海羅氏制藥有限公司生產(chǎn)；5FU(250mg/支)為天津金耀氨基酸有限公司生產(chǎn)；重組改構人TNFα（5MU/支）為上海賽達生物藥業(yè)有限公司生產(chǎn).TP酶檢測試劑盒為羅氏診斷公司提供.BCA蛋白濃

6、度測定試劑盒為碧云天生物技術研究所提供.　　1.2方法　　1.2.1TNFα對腫瘤細胞中TP酶的調節(jié)將長滿培養(yǎng)瓶對數(shù)生長期細胞用無菌PBS洗滌后加入2.5g/L胰蛋白酶消化細胞，800r/min離心8min，加入培養(yǎng)液調整細胞密度為4×109/L.每瓶加入細胞懸液1mL，再加入培養(yǎng)液4mL.37℃，50mL/LCO2，飽和濕度培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng)24h.棄去原培養(yǎng)液，加入含20，200，1000kU/LTNFα的新鮮培養(yǎng)液，繼續(xù)培養(yǎng)48h，消化、收集、凍存細胞.另培養(yǎng)24h后棄去原培養(yǎng)液，加入含TNFα的新鮮培養(yǎng)液，使培養(yǎng)液中T

7、NFα的濃度為200kU/L，繼續(xù)培養(yǎng)24，48，72，96h，消化、收集、凍存細胞.取出-80℃冰箱中凍存的細胞，反復凍溶5次，使細胞充分裂解.Eppendorff離心5min（13000r/min），后收集上清150μL.按照說明書利用BCA法檢測上清液蛋白濃度，ELISA檢測腫瘤細胞中胸苷磷酸化酶水平.應用SPSS統(tǒng)計分析軟件，繪制標準曲線，再根據(jù)測得的A值計算出TP酶濃度.腫瘤細胞中的TP酶含量（μg/g）=樣品TP酶濃度（μg/L）/上清液蛋白質的濃度（g/L）.　　1.2.2MTT法檢測藥物敏感試驗將對數(shù)生長期細胞

8、接種于96孔培養(yǎng)板，每孔加入細胞懸液200μL（1×104個），置37℃，50mL/LCO2孵箱中培養(yǎng)24h.棄去原培養(yǎng)液，分別加入含有藥物（5FU，5dFUrd）的不同濃度（100，10，1，0.1，0.01mg/L）的新鮮培養(yǎng)液200μL（每孔設3個復孔