tnfα對tp酶的調(diào)節(jié)及其對5fu前體藥作用的影響論文

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1、TNFα對TP酶的調(diào)節(jié)及其對5FU前體藥作用的影響論文【摘要】目的：探討TNFα對胸苷磷酸化酶（TP酶）的調(diào)節(jié)及其與5FU前體藥化療敏感性的關(guān)系.方法：應(yīng)用TNFα誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞中的TP酶，ELISA法檢測腫瘤組織中TP酶蛋白水平，采用MTT法檢測藥物敏感性變化.結(jié)果：大腸癌細(xì)胞株Lovo和SCF7中的TP酶含量為（30.1±1.4）μg/g，高于MCF/ADR的TP酶（18.8±0.4）μg/g.TNFα上調(diào)MCF7和MCF/ADR中TP酶表達(dá)呈時間和劑量依賴性.耐藥株MCF/ADR中TP酶上調(diào)高達(dá)（28.4±1.2）μg/g

2、，未達(dá)非耐藥細(xì)胞株水平.MCF7細(xì)胞中TP酶上調(diào)1.27倍，對氟鐵龍的IC50降低了1.33倍，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義.結(jié)論：TNFα能劑量時間依賴性上調(diào)腫瘤細(xì)胞的TP酶.freelidinephosphorylase(TP)anditseffectonthesensitivityofprodrugto5fluorouracil(5FU)incancercelllines.METHODS：TheTPleveloftumorcellsearsuredbyELISA.AndthentheMTTassayallconcentrationofTNF

3、α.RESULTS：TheTPinLovoorSCF7displayeda1.27foldincrease,edependentincreaseinthelevelofTPandenhancethesensitivityofMCF7to5FU.【Keyidinephosphorylase;fluorouracil;floxuridine;capecitabine;tumornecrosisfactoralpha0引言胸苷磷酸化酶（thymidinephosphorylase，TP酶）是近年來發(fā)現(xiàn)的嘧啶核苷代謝過程中的一個關(guān)鍵酶，是5

4、FU前體藥物（卡培他濱、脫氧氟尿苷）轉(zhuǎn)化為氟尿嘧啶的最后一個限速酶.近來一些研究表明，胸苷磷酸化酶與腫瘤的化療關(guān)系密切，它能增強(qiáng)患者對5氟尿嘧啶(5FU)前體藥物化療的敏感性，提高化療效果，改善腫瘤患者的預(yù)后［1］.TNFα，INFγ等多種因子能夠上調(diào)腫瘤細(xì)胞內(nèi)TP酶的表達(dá).我們應(yīng)用TNFα誘導(dǎo)結(jié)腸癌和乳腺癌細(xì)胞中TP上調(diào)并觀察其對5FU前體藥物的細(xì)胞毒作用，為指導(dǎo)臨床用藥提供理論依據(jù).1材料和方法1.1材料人結(jié)腸癌細(xì)胞株Lovo和SCF7和MCF7/ADR由天津腫瘤醫(yī)院中心實(shí)驗(yàn)室保存.RPMI1640培養(yǎng)液、胎牛血清購自G

5、ibco公司，MTT和DMSO為Sigma公司產(chǎn)品.氟鐵龍為上海羅氏制藥有限公司生產(chǎn)；5FU(250mg/支)為天津金耀氨基酸有限公司生產(chǎn)；重組改構(gòu)人TNFα（5MU/支）為上海賽達(dá)生物藥業(yè)有限公司生產(chǎn).TP酶檢測試劑盒為羅氏診斷公司提供.BCA蛋白濃度測定試劑盒為碧云天生物技術(shù)研究所提供.1.2方法1.2.1TNFα對腫瘤細(xì)胞中TP酶的調(diào)節(jié)將長滿培養(yǎng)瓶對數(shù)生長期細(xì)胞用無菌PBS洗滌后加入2.5g/L胰蛋白酶消化細(xì)胞，800r/min離心8min，加入培養(yǎng)液調(diào)整細(xì)胞密度為4×109/L.每瓶加入細(xì)胞懸液1mL，再加入培養(yǎng)液4mL.37℃

6、，50mL/LCO2，飽和濕度培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng)24h.棄去原培養(yǎng)液，加入含20，200，1000kU/LTNFα的新鮮培養(yǎng)液，繼續(xù)培養(yǎng)48h，消化、收集、凍存細(xì)胞.另培養(yǎng)24h后棄去原培養(yǎng)液，加入含TNFα的新鮮培養(yǎng)液，使培養(yǎng)液中TNFα的濃度為200kU/L，繼續(xù)培養(yǎng)24，48，72，96h，消化、收集、凍存細(xì)胞.取出-80℃冰箱中凍存的細(xì)胞，反復(fù)凍溶5次，使細(xì)胞充分裂解.Eppendorff離心5min（13000r/min），后收集上清150μL.按照說明書利用BCA法檢測上清液蛋白濃度，ELISA檢測腫瘤細(xì)胞中胸苷磷酸化酶水平.應(yīng)

7、用SPSS統(tǒng)計(jì)分析軟件，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，再根據(jù)測得的A值計(jì)算出TP酶濃度.腫瘤細(xì)胞中的TP酶含量（μg/g）=樣品TP酶濃度（μg/L）/上清液蛋白質(zhì)的濃度（g/L）.1.2.2MTT法檢測藥物敏感試驗(yàn)將對數(shù)生長期細(xì)胞接種于96孔培養(yǎng)板，每孔加入細(xì)胞懸液200μL（1×104個），置37℃，50mL/LCO2孵箱中培養(yǎng)24h.棄去原培養(yǎng)液，分別加入含有藥物（5FU，5dFUrd）的不同濃度（100，10，1，0.1，0.01mg/L）的新鮮培養(yǎng)液200μL（每孔設(shè)3個復(fù)孔），繼續(xù)培養(yǎng)48~120h.每孔加5g/LMTT20μL，培養(yǎng)4h后，

8、吸棄上清，每孔加入二甲基亞砜150μL，振動10min，用酶標(biāo)儀測定每孔A570nm.計(jì)算化療藥物的抑制率=（1-實(shí)驗(yàn)孔A570/對照孔A570）×100%.選擇一