cbiq對肺泡上皮細(xì)胞氧化損傷的保護作用

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1、CBIQ對肺泡上皮細(xì)胞氧化損傷的保護作用作者：黃穎，張丙芳，招明高，王曉明，黃晨【摘要】目的：研究CBIQ對肺泡上皮細(xì)胞株A549氧化損傷的保護作用.方法：應(yīng)用MTT法檢測不同濃度CBIQ對正常及過氧化氫（H2O2）損傷的肺泡上皮細(xì)胞株A549的保護作用；DNALadder檢測細(xì)胞凋亡；相差顯微鏡觀察Hoechst染色后細(xì)胞凋亡形態(tài)的變化.結(jié)果：H2O2損傷后的A549細(xì)胞經(jīng)不同濃度CBIQ處理后，細(xì)胞死亡數(shù)明顯減少.濃度為1×10-2，1×10-3mmol/L的CBIQ組平均細(xì)胞存活率分別為(

2、76.1±0.8)%，(71.3±1.0)%，較損傷組(46.3±0.9)%明顯增高(P<0.01)；終濃度為100μmol/LH2O2及10μmol/LCBIQ共同干預(yù)A549細(xì)胞4h后，可檢測到凋亡標(biāo)志性的DNA梯形帶；實驗組細(xì)胞凋亡率較對照組明顯下降(P<0.05).結(jié)論：在一定濃度范圍內(nèi)，CBIQ對氧化損傷的A549細(xì)胞生長有濃度依賴性的保護作用，并可抑制氧化損傷的A549細(xì)胞發(fā)生凋亡.【關(guān)鍵詞】CBIQ；急性?。环?損傷；肺泡；上皮細(xì)胞　　【Abstract】AIM:Toe

3、xploretheprotectiveroleof4Chlorobenzo［F］isoquinoline(CBIQ)inoxidativelydamagedhumanlungepithelialcelllineA549.METHODS:AfterculturedalA549cellsandtheoxidativelydamagedcellsorphologicalchangeicroscope.RESULTS:AfterA549cellsonstrated.Thecellviabilityr

4、ateofthegroupby1×10-2and1×10-3mmol/LCBIQarkedlythantherateoftheinjurygroup(46.3±0.9)%(P<0.01).Fourhoursafterexposureto100μmol／LH2O2and10μmol/LCBIQ,A549cellsundertooktheapoptosisdisplayedbytheDNALadder.Thepercentageofcellapoptosisentalgroupthaninco

5、ntrolgroup(P<0.05).CONCLUSION:Inacertainconcentrationrange,CBIQcandosedependentlyprotecthumanlungepithelialcellsfromoxidativelydamage.Theactivatorofcysticfibrosistransmembraneconductanceregulator(CFTR)caninhibittheapoptosisofoxidativelydamagedA54

6、9cells.　　【Keyonaryalveoli;epithelialcells　　0引言　　急性肺損傷(acutelunginjury，ALI)是急性呼吸衰竭的重要病因之一.氧化應(yīng)激時產(chǎn)生的大量氧自由基和H2O2作用于肺部時可引起肺泡上皮細(xì)胞活性降低，甚至產(chǎn)生ALI.肺泡上皮細(xì)胞Na+，Cl-異?？缒まD(zhuǎn)運在肺水腫形成中起重要作用［1］.囊性纖維跨膜電導(dǎo)調(diào)節(jié)因子(CFTR)是肺泡上皮細(xì)胞中一種氯通道蛋白，CFTR異常可降低其對Na+通道的抑制作用，致Na+重吸收增加，加上Cl-分泌減少，易導(dǎo)致

7、肺組織水腫.CBIQ是一種CFTR氯通道特異性開放劑［2-3］，能促進CFTR氯通道開放，使Na+向細(xì)胞內(nèi)流動增加，提高肺泡的液體清除能力.我們采用A549細(xì)胞作為肺泡上皮細(xì)胞模型，觀察CBIQ對氧化應(yīng)激引起A549細(xì)胞損傷的保護作用，探討CFTR氯通道及CBIQ在ALI發(fā)生發(fā)展中的作用.　　1材料和方法　　1．1材料　　人肺泡上皮細(xì)胞模型A549細(xì)胞由第四軍醫(yī)大學(xué)生物化學(xué)與分子生物學(xué)教研室惠贈.CBIQ（Sigma公司）；噻唑藍(lán)(MTT)（Sigma公司）；DNALadder試劑盒、熒光染料H

8、oechst33258（上海碧云天公司）；新生牛血清(杭州四季青)1640培養(yǎng)液(Gibco公司).　　1．2方法　　1．2．1噻唑藍(lán)(MTT)比色實驗測定細(xì)胞存活率用含100mL/L熱滅活新生牛血清的1640培養(yǎng)基培養(yǎng)A549細(xì)胞，置37℃，50mL/LCO2及充分飽和濕度的培養(yǎng)箱內(nèi)，隔日換培養(yǎng)液，直至細(xì)胞鋪滿瓶底的70%～80%，用胰蛋白酶消化并傳代，選對數(shù)生長期A549細(xì)胞以2×103個/孔接種于2塊96孔培養(yǎng)板，細(xì)胞貼壁培養(yǎng)24h后開始干預(yù).第1塊板分2組.對照組：只加培養(yǎng)液；實驗組：分