cbiq對肺泡上皮細胞氧化損傷的保護作用論文

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1、CBIQ對肺泡上皮細胞氧化損傷的保護作用論文黃穎，張丙芳，招明高，王曉明，黃晨【摘要】目的：研究CBIQ對肺泡上皮細胞株A549氧化損傷的保護作用.方法：應用MTT法檢測不同濃度CBIQ對正常及過氧化氫（H2O2）損傷的肺泡上皮細胞株A549的保護作用；DNALadder檢測細胞凋亡；相差顯微鏡觀察Hoechst染色后細胞凋亡形態(tài)的變化.結(jié)果：H2O2損傷后的A549細胞經(jīng)不同濃度CBIQ處理后，細胞死亡數(shù)明顯減少.濃度為1×10-2，1×10-3mmol/L的CBIQ組平均細胞存活率分別為(76.1±0.8)%，(71.3±1.0)%.freelol/LH2O2及10μmol/LCBIQ共

2、同干預A549細胞4h后，可檢測到凋亡標志性的DNA梯形帶；實驗組細胞凋亡率較對照組明顯下降(P0.05).結(jié)論：在一定濃度范圍內(nèi)，CBIQ對氧化損傷的A549細胞生長有濃度依賴性的保護作用，并可抑制氧化損傷的A549細胞發(fā)生凋亡.【關(guān)鍵詞】CBIQ；急性??；肺/損傷；肺泡；上皮細胞【Abstract】AIM:Toexploretheprotectiveroleof4Chlorobenzo［F］isoquinoline(CBIQ)inoxidativelydamagedhumanlungepithelialcelllineA549.METHODS:AfterculturedalA549c

3、ellsandtheoxidativelydamagedcellsorphologicalchangeicroscope.RESULTS:AfterA549cellsonstrated.Thecellviabilityrateofthegroupby1×10-2and1×10-3mmol/LCBIQarkedlythantherateoftheinjurygroup(46.3±0.9)%(P0.01).Fourhoursafterexposureto100μmol／LH2O2and10μmol/LCBIQ,A549cellsundertooktheapoptosisdisplayedbyth

4、eDNALadder.Thepercentageofcellapoptosisentalgroupthanincontrolgroup(P0.05).CONCLUSION:Inacertainconcentrationrange,CBIQcandosedependentlyprotecthumanlungepithelialcellsfromoxidativelydamage.Theactivatorofcysticfibrosistransmembraneconductanceregulator(CFTR)caninhibittheapoptosisofoxidativelydamage

5、dA549cells.【Keyonaryalveoli;epithelialcells0引言急性肺損傷(acutelunginjury，ALI)是急性呼吸衰竭的重要病因之一.氧化應激時產(chǎn)生的大量氧自由基和H2O2作用于肺部時可引起肺泡上皮細胞活性降低，甚至產(chǎn)生ALI.肺泡上皮細胞Na+，Cl-異常跨膜轉(zhuǎn)運在肺水腫形成中起重要作用［1］.囊性纖維跨膜電導調(diào)節(jié)因子(CFTR)是肺泡上皮細胞中一種氯通道蛋白，CFTR異常可降低其對Na+通道的抑制作用，致Na+重吸收增加，加上Cl-分泌減少，易導致肺組織水腫.CBIQ是一種CFTR氯通道特異性開放劑［2-3］，能促進CFTR氯通道開放，使Na+向細

6、胞內(nèi)流動增加，提高肺泡的液體清除能力.我們采用A549細胞作為肺泡上皮細胞模型，觀察CBIQ對氧化應激引起A549細胞損傷的保護作用，探討CFTR氯通道及CBIQ在ALI發(fā)生發(fā)展中的作用.1材料和方法1．1材料人肺泡上皮細胞模型A549細胞由第四軍醫(yī)大學生物化學與分子生物學教研室惠贈.CBIQ（Sigma公司）；噻唑藍(MTT)（Sigma公司）；DNALadder試劑盒、熒光染料Hoechst33258（上海碧云天公司）；新生牛血清(杭州四季青)1640培養(yǎng)液(Gibco公司).1．2方法1．2．1噻唑藍(MTT)比色實驗測定細胞存活率用含100mL/L熱滅活新生牛血清的1640培養(yǎng)基培養(yǎng)

7、A549細胞，置37℃，50mL/LCO2及充分飽和濕度的培養(yǎng)箱內(nèi)，隔日換培養(yǎng)液，直至細胞鋪滿瓶底的70%～80%，用胰蛋白酶消化并傳代，選對數(shù)生長期A549細胞以2×103個/孔接種于2塊96孔培養(yǎng)板，細胞貼壁培養(yǎng)24h后開始干預.第1塊板分2組.對照組：只加培養(yǎng)液；實驗組：分別加入不同濃度的CBIQ（濃度分別為1×10-1，1×10-2，1×10-3，1×10-4，1×10-5mmol/L）.反復試驗8次