ki67蛋白在人皮膚血管瘤組織中的表達及意義論文

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1、Ki67蛋白在人皮膚血管瘤組織中的表達及意義論文【摘要】目的：探討Ki67蛋白在人皮膚血管瘤組織中的表達及在血管瘤發(fā)生、發(fā)展過程中的意義。方法：應(yīng)用免疫組織化學(xué)方法檢測了血管瘤增生期、退化期以及正常皮膚組織中Ki67蛋白的表達水平,采用HPIAS1000圖文報告管理系統(tǒng)對Ki67蛋白的表達進行定量分析，并用SPSS11.5軟件對各組免疫組織化學(xué)反應(yīng)陽性顆粒平均光密度、陽性面積率做單因素方差分析和SNK(q)檢驗。結(jié)果：Ki67蛋白在增生期血管瘤內(nèi)皮細胞呈高表達,退化期呈低表達，增生期血管瘤內(nèi)皮細胞與退化期比

2、較,Ki67蛋白的表達差異有顯著性(P0.05);退化期血管瘤內(nèi)皮細胞Ki67蛋白表達水平與正常組織相比，差異無顯著性(P0.01)。結(jié)論：Ki67可作為評價細胞增殖狀態(tài)的一個指標。【關(guān)鍵詞】皮膚血管瘤;Ki67蛋白;免疫組織化學(xué);統(tǒng)計分析血管瘤是嬰幼兒中發(fā)病率最高的一種以內(nèi)皮細胞異常增殖為組織學(xué)特征的腫瘤。新生兒患病率為1.1%～3.8%，至1歲時可高達10%。雖然部分血管瘤可以自行消退，但仍有部分未退化的血管瘤可持續(xù)發(fā)展或其生長部位特殊而具有一定的危險性，如果位于顏面、顱內(nèi)及口腔可引起明顯的畸形及功能障礙

3、，如持續(xù)發(fā)展可產(chǎn)生潰瘍、出血、感染等一系列并發(fā)癥;位于顏面及口腔的血管瘤可引起明顯的外觀畸形及功能障礙.freelpus公司)。1.3方法1.3.1蠟塊切片厚5μm，貼片于涂有多聚賴氨酸的潔凈載玻片上，置于烤箱烤干待用。常規(guī)HE染色。1.3.2免疫組織化學(xué)SP法檢測Ki67抗原具體步驟：①4μm組織切片常規(guī)脫蠟至水后，0.01MPBS(pH7.4)漂洗3×3min;②抗原修復(fù)(檸檬酸緩沖液微波抗原修復(fù)法)，室溫自然冷卻后，0.01MPBS(pH7.4)漂洗5×3min;③滴加3%過氧化氫，37℃濕盒孵育10m

4、in以抑制內(nèi)源性過氧化物酶活性，0.01MPBS(pH7.4)漂洗3×3min;④正常羊血清37℃濕盒孵育10min以減少非特異性背景;⑤甩去多余血清，分別滴加一抗，4℃孵育過夜，0.01MPBS(pH7.4)漂洗3×5min;⑥滴加生物素標記的二抗37℃濕盒孵育10min，0.01MPBS(pH7.4)漂洗3×3min;⑦滴加鏈霉素抗生物素蛋白過氧化物復(fù)合物37℃濕盒孵育10min，0.01MPBS(pH7.4)漂洗3×3min;⑧滴加新鮮配置的DAB顯色液顯色，光鏡下控制反應(yīng)時間(約3～5min)，自來

5、水沖洗終止反應(yīng);⑨蘇木素復(fù)染，流水沖洗，1%鹽酸酒精分色數(shù)秒，流水沖洗，0.1%氨水返藍;⑩梯度酒精脫水，二甲苯透明，中性樹膠封片并鏡檢;用PBS代替一抗作為陰性對照組，購買的陽性片作為陽性對照組。1.3.3免疫組織化學(xué)結(jié)果判斷Ki67蛋白陽性染色為棕黃色顆粒，主要定位于細胞核內(nèi)。陰性對照組除細胞核染成藍色外，應(yīng)無棕黃色反應(yīng)物。采用HPIAS1000高清晰度彩色病理圖文報告管理系統(tǒng)(同濟千屏影像公司)對Ki67蛋白的表達進行定量分析，每張切片隨機選取5個完整而不重疊的高倍鏡視野(×400),測定每個視野下陽

6、性反應(yīng)的平均光密度、陽性反應(yīng)面積和所有細胞總面積,計算陽性面積率。以每例5個視野的平均光密度、陽性面積率的平均值作為該例的測量值(陽性面積率=單位面積中陽性反應(yīng)的總面積/單位面積中細胞的總面積×100%)。1.4統(tǒng)計學(xué)處理數(shù)據(jù)以均數(shù)±標準差表示，用SPSS11.5軟件對各組免疫組織化學(xué)反應(yīng)陽性顆粒的平均光密度、陽性面積率做單因素方差分析和SNK(q)檢驗，檢驗水準α為0.05。2結(jié)果增生期血管瘤內(nèi)皮細胞胞核內(nèi)可見密集分布的棕黃色顆粒，Ki67蛋白呈陽性表達;退化期血管瘤內(nèi)皮細胞胞核內(nèi)可見少量的棕黃色顆粒，Ki

7、67蛋白呈陰性表達;正常皮膚組織血管內(nèi)皮細胞胞核內(nèi)可見少量的棕黃色顆粒，Ki67蛋白表達呈弱陽性。圖像分析結(jié)果顯示:增生期組Ki67蛋白表達的平均光密度為0.3671±0.0264,退化期組Ki67蛋白表達的平均光密度為0.0973±0.0062,.freelangioma)是嬰幼兒較常見的一種良性血管腫瘤，也見于成人。雖然部分個體皮膚的血管瘤可以自行消退，但生長部位特殊以及部分未自行消退的血管瘤具有一定的危險性。如：持續(xù)發(fā)展的血管瘤可產(chǎn)生潰瘍、出血、感染等一系列并發(fā)癥;而位于顏面部、顱內(nèi)及口腔的血管瘤可引起

8、明顯的外觀畸形及功能障礙;大面積及多發(fā)性血管瘤由于占據(jù)大量血流可導(dǎo)致高輸出性心力衰竭，直接威脅患者的生命。皮膚血管瘤好發(fā)于頭、面頸，次為四肢和軀干。發(fā)生率在新生兒為1.1%～2.6%，約有40%在出生時即可見到，時常在生后2～4周時快速生長。因此對這一部分血管瘤采取何種治療手段是目前臨床及基礎(chǔ)研究較為關(guān)注的課題。Ki67屬于非組蛋白，對蛋白酶高度敏感，很難分離提取。它的測定是評估人類各種組織增殖組分