pma聯(lián)合鈣離子載體誘導(dǎo)k562細胞向樹突狀細胞分化

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1、PMA聯(lián)合鈣離子載體誘導(dǎo)K562細胞向樹突狀細胞分化【摘要】目的探討卟啉醇肉豆蔻酸乙酸酯（PMA）聯(lián)合鈣離子載體（CI）誘導(dǎo)K562細胞向樹突狀細胞（DC）分化的作用。方法對數(shù)生長期的K562細胞在含PMA和CI的培養(yǎng)液中培養(yǎng)96h后，倒置相差顯微鏡下觀察細胞形態(tài)，用流式細胞儀檢測細胞表型，用MTT法檢測其刺激淋巴細胞增殖的能力。結(jié)果PMA聯(lián)合CI組細胞形態(tài)發(fā)生明顯變化，表面出現(xiàn)許多細小的突起，細胞表面CD83、CD86、CD80、CD40、HLADR和CD1a表達上調(diào)，并且可以刺激淋巴細胞的增殖反應(yīng)。結(jié)論PMA聯(lián)合CI可以有效地使K562細胞向DC分

2、化?！娟P(guān)鍵詞】K562細胞樹突細胞十四酰佛波乙酯鈣通道離子載體ABSTRACT:ObjectiveToexploretheeffectofPMA(phorbolmyristateacetate)andcalciumionophore(CI)ininducingthedifferentiationofleukemiacelllineK562intoactivateddendriticcells(DC).MethodsK562cellsonmediumcontainingCI(A23187)andPMAfor96h.Thecellmorphologyicro

3、scopeandtheelectronicmicroscope.TheviabilityrateofK562cellsculturedineachgroupinedbythetrypanbluestaining.Theimmunologicphenotypesetry.Theproliferationreactionoflymphocytecellsetry.ResultsAfter96htreatmentl)andPMA(10μg/mL),thecellsexhibitedthecharacteristicDCmorphology,CD83,CD86,

4、CD80,CD40andHLADR,CD1aexpressionulatetheproliferationofallogenEicTcells.ConclusionCIinbinationchannels;ionophores福建醫(yī)科大學(xué)學(xué)報2008年7月第42卷第4期曾曉明等：PMA聯(lián)合鈣離子載體誘導(dǎo)K562細胞向樹突狀細胞分化樹突狀細胞（DC）是體內(nèi)最強的抗原提呈細胞（APC），來源于髓系祖細胞。在白血病的細胞中，DC的祖細胞和白血病細胞同樣來源于骨髓造血干細胞，因此可以刺激原始細胞分化成DC，直接呈遞完整的白血病抗原，從而刺激T細胞產(chǎn)生抗腫瘤效應(yīng)

5、[1]。筆者觀察了卟啉醇肉豆蔻酸乙酸酯(phorbolmyristateacetate，PMA)聯(lián)合鈣離子載體（calciumionorphore，CI）誘導(dǎo)K562細胞向DC分化的作用,探討運用細胞株進行抗白血病免疫治療的可行性?！　?材料與方法　　1.1材料　　K562細胞株由福建醫(yī)科大學(xué)藥理學(xué)研究所饋贈。CI（A23187）、PMA為Sigma公司產(chǎn)品。RPMI1640干粉為美國Gibco公司產(chǎn)品。胎牛血清(FCS)為杭州四季青生物制品公司產(chǎn)品。異硫氰酸熒光素（FITC）標記的抗HLADR、CD80單抗，PE標記的抗CD86，CD83，CD40和

6、CD1a單抗及同亞型對照抗體（鼠抗人），均為美國eBioscience公司產(chǎn)品。絲裂霉素C為上海Roche公司產(chǎn)品。6孔培養(yǎng)板、96孔培養(yǎng)板均為Coasta公司產(chǎn)品。L谷氨酰胺、MTT及臺盼藍制劑為廈門泰京生物工程有限公司產(chǎn)品，人淋巴細胞分離液為天津市灝洋生物制品科技有限責(zé)任公司產(chǎn)品?！　?.2方法　　1.2.1K562細胞培養(yǎng)及形態(tài)觀察　?。?）取對數(shù)生長期的K562細胞，以完全RPMI1640培養(yǎng)基（加入10％FCS，10mmol/LL谷氨酰胺）懸浮，以1×106mL-1接種于6孔板中，每孔2mL，分4組。PMA+CI組：加入PMA和CI,使PM

7、A最終濃度為10ng/mL，CI最終濃度為375ng/mL；PMA組：只加入PMA，PMA最終濃度為10ng/mL；CI組：只加入CI，CI最終濃度為375ng/mL；對照組：只加培養(yǎng)基。每組細胞為一板（n=6），37℃、體積分數(shù)為0.05的CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，隔天半液換量。實驗組（包括PMA+CI組、PMA組及CI組）另外加入半量新鮮試劑，對照組只補充新鮮培養(yǎng)基。培養(yǎng)96h后收獲細胞。（2）形態(tài)觀察。收獲4組細胞，在倒置顯微鏡下觀察細胞形態(tài)。（3）細胞活率測定。收獲各實驗組的K562細胞，按臺盼藍1滴、K562細胞9滴的比例混合均勻，<30s滴于

8、細胞計數(shù)板上，顯微鏡下計數(shù)。計算細胞活率=不染色細胞/（染色細胞＋不染色細胞）×