pma聯(lián)合鈣離子載體誘導(dǎo)k562細(xì)胞向樹(shù)突狀細(xì)胞分化論文

《pma聯(lián)合鈣離子載體誘導(dǎo)k562細(xì)胞向樹(shù)突狀細(xì)胞分化論文》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在工程資料-天天文庫(kù)。

1、PMA聯(lián)合鈣離子載體誘導(dǎo)K562細(xì)胞向樹(shù)突狀細(xì)胞分化論文【摘要】目的探討卟啉醇肉豆蔻酸乙酸酯（PMA）聯(lián)合鈣離子載體（CI）誘導(dǎo)K562細(xì)胞向樹(shù)突狀細(xì)胞（DC）分化的作用。方法對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的K562細(xì)胞在含PMA和CI的培養(yǎng)液中培養(yǎng)96h后，倒置相差顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)，用流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞表型，用MTT法檢測(cè)其刺激淋巴細(xì)胞增殖的能力。結(jié)果PMA聯(lián)合CI組細(xì)胞形態(tài)發(fā)生明顯變化，表面出現(xiàn)許多細(xì)小的突起，細(xì)胞表面CD83、CD86、CD80、CD40、HLADR和CD1a表達(dá)上調(diào)，并且可以刺激淋巴細(xì)胞的增殖反應(yīng)。結(jié)論P(yáng)MA聯(lián)合CI可以有效地使K562細(xì)胞向DC分化?！娟P(guān)鍵詞】K562細(xì)胞樹(shù)突細(xì)

2、胞十四酰佛波乙酯鈣通道離子載體ABSTRACT:ObjectiveToexploretheeffectofPMA(phorbolmyristateacetate)andcalciumionophore(CI)ininducingthedifferentiationofleukemiacelllineK562intoactivateddendriticcells(DC).MethodsK562cellsonmediumcontainingCI(A23187)andPMAfor96h.Thecellmorphologyicroscopeandtheelectronicmicroscope.Th

3、eviabilityrateofK562cellsculturedineachgroupinedbythetrypanbluestaining.Theimmunologicphenotypesetry.Theproliferationreactionoflymphocytecellsetry.ResultsAfter96htreatmentl)andPMA(10μg/mL),thecellsexhibitedthecharacteristicDCmorphology,CD83,CD86,CD80,CD40andHLADR,CD1aexpressionulatetheproliferati

4、onofallogeneicTcells.ConclusionCIinbinationchannels;ionophores福建醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)2008年7月第42卷第4期曾曉明等：PMA聯(lián)合鈣離子載體誘導(dǎo)K562細(xì)胞向樹(shù)突狀細(xì)胞分化樹(shù)突狀細(xì)胞（DC）是體內(nèi)最強(qiáng)的抗原提呈細(xì)胞（APC），來(lái)源于髓系祖細(xì)胞。在白血病的細(xì)胞中.freelyristateacetate，PMA)聯(lián)合鈣離子載體（calciumionorphore，CI）誘導(dǎo)K562細(xì)胞向DC分化的作用,探討運(yùn)用細(xì)胞株進(jìn)行抗白血病免疫治療的可行性。1材料與方法1.1材料K562細(xì)胞株由福建醫(yī)科大學(xué)藥理學(xué)研究所饋贈(zèng)。CI（A23187）、

5、PMA為Sigma公司產(chǎn)品。RPMI1640干粉為美國(guó)Gibco公司產(chǎn)品。胎牛血清(FCS)為杭州四季青生物制品公司產(chǎn)品。異硫氰酸熒光素（FITC）標(biāo)記的抗HLADR、CD80單抗，PE標(biāo)記的抗CD86，CD83，CD40和CD1a單抗及同亞型對(duì)照抗體（鼠抗人），均為美國(guó)eBioscience公司產(chǎn)品。絲裂霉素C為上海Roche公司產(chǎn)品。6孔培養(yǎng)板、96孔培養(yǎng)板均為Coasta公司產(chǎn)品。L谷氨酰胺、MTT及臺(tái)盼藍(lán)制劑為廈門(mén)泰京生物工程有限公司產(chǎn)品，人淋巴細(xì)胞分離液為天津市灝洋生物制品科技有限責(zé)任公司產(chǎn)品。1.2方法1.2.1K562細(xì)胞培養(yǎng)及形態(tài)觀察（1）取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的K562細(xì)胞，以

6、完全RPMI1640培養(yǎng)基（加入10％FCS，10mmol/LL谷氨酰胺）懸浮，以1×106mL-1接種于6孔板中，每孔2mL，分4組。PMA+CI組：加入PMA和CI,使PMA最終濃度為10ng/mL，CI最終濃度為375ng/mL；PMA組：只加入PMA，PMA最終濃度為10ng/mL；CI組：只加入CI，CI最終濃度為375ng/mL；對(duì)照組：只加培養(yǎng)基。每組細(xì)胞為一板（n=6），37℃、體積分?jǐn)?shù)為0.05的CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，隔天半液換量。實(shí)驗(yàn)組（包括PMA+CI組、PMA組及CI組）另外加入半量新鮮試劑，對(duì)照組只補(bǔ)充新鮮培養(yǎng)基。培養(yǎng)96h后收獲細(xì)胞。（2）形態(tài)觀察。收獲4組細(xì)胞

7、，在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)。（3）細(xì)胞活率測(cè)定。收獲各實(shí)驗(yàn)組的K562細(xì)胞，按臺(tái)盼藍(lán)1滴、K562細(xì)胞9滴的比例混合均勻，30s滴于細(xì)胞計(jì)數(shù)板上，顯微鏡下計(jì)數(shù)。計(jì)算細(xì)胞活率=不染色細(xì)胞/（染色細(xì)胞＋不染色細(xì)胞）×100％1.2.2電鏡觀察收獲的細(xì)胞經(jīng)離心沉淀，用3.0%戊二醛和1.0%餓酸固定，經(jīng)乙醇梯度脫水，超薄切片置透射電鏡觀察（由福建醫(yī)科大學(xué)電鏡室協(xié)助完成）。1.2.3流式細(xì)胞儀檢測(cè)收獲的細(xì)胞用PBS洗滌2次后重