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《中藥免疫調(diào)節(jié)劑對小鼠細(xì)胞免疫功能的影響論文》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、中藥免疫調(diào)節(jié)劑對小鼠細(xì)胞免疫功能的影響論文.freelL/L濃度的含藥血清優(yōu)于100mL/L濃度的含藥血清（P0.05）。結(jié)論:該中藥免疫調(diào)節(jié)劑能顯著促進免疫抑制小鼠淋巴細(xì)胞的轉(zhuǎn)化,.freelresco公司）,以pH7.2的RPMI1640培養(yǎng)液制成5g/L溶液;PHA（Sigma公司）,以pH7.2的RPMI1640培養(yǎng)液制成200mg/L溶液;小牛血清(杭州四季青生物工程有限公司,批號:051215);環(huán)磷酰胺（Cy,上海華聯(lián)制藥有限公司,批號:050306）;中藥免疫調(diào)節(jié)劑（ZY）:黃芪、茯苓、白術(shù)、防風(fēng)、甘草、桔梗組成復(fù)方免疫調(diào)節(jié)劑,采用自動循環(huán)煎藥機提取濃縮,按照生藥量計
2、算使終濃度為300g/L,購自山東泰安工商聯(lián)醫(yī)藥商行。玉屏風(fēng)散（YPF）:選自《中國獸藥典》;MC0175型CO2恒溫培養(yǎng)箱（日本SANYO）;COIC3168型倒置相差顯微鏡（重慶光學(xué)儀器廠）;2010型BLOCELLHT系列酶標(biāo)儀（鄭州博塞生物工程有限責(zé)任公司）;SI1640培養(yǎng)液調(diào)整細(xì)胞密度至5×109/L,并用臺盼藍(lán)染色檢測細(xì)胞活力95%。1.2.4脾淋巴細(xì)胞增殖反應(yīng)的測定1.2.4.1含藥血清對正常小鼠脾淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化的影響當(dāng)血清濃度為50mL/L時,在96孔細(xì)胞培養(yǎng)板上,每孔加入50μL5×109/L小鼠脾淋巴細(xì)胞,45μL不含血清的RPMI1640及5μL含藥血清;當(dāng)血清
3、濃度為100mL/L時,在96孔細(xì)胞培養(yǎng)板上,加入50μL5×109/L小鼠脾淋巴細(xì)胞,40μL不含血清的RPMI1640液及10μL含藥血清。每組血清設(shè)4個重復(fù)孔,并與同等濃度的小牛血清RPIM1640液作比較,同時設(shè)培養(yǎng)液空白對照。1.2.4.2各試驗組小鼠脾細(xì)胞的淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗在96孔細(xì)胞培養(yǎng)板上,每孔加入用含100mL/L小牛血清RPMI1640稀釋的5×109/L小鼠脾淋巴細(xì)胞95μL,A、B、C、D4橫排各孔均加入不含血清的RPMI1640液5μL,E、F、G、H4橫排各孔均加入200mg/L的PHA5μL,每組細(xì)胞設(shè)4個重復(fù)孔,并用含100mL/L小牛血清的RPMI1
4、640作空白對照。上述細(xì)胞均置37℃、50mL/LCO2及飽和濕度下培養(yǎng)44h,各孔加5g/L的MTT10μL,繼續(xù)培養(yǎng)4h后,加入SDSDMF溶解液50μL,30min后用酶標(biāo)儀測A570,結(jié)果用刺激指數(shù)（SI）表示:SI＝試驗孔A均值/對照孔A均值×100%。1.2.5數(shù)據(jù)處理應(yīng)用統(tǒng)計軟件SPSS10.0進行分析,所有數(shù)據(jù)用均值±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示。2結(jié)果2.1各組小鼠脾淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化結(jié)果Cy對照組小鼠脾淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化的A570值明顯低于正常對照組,有統(tǒng)計學(xué)差異（P005）;中藥免疫調(diào)節(jié)劑組和玉屏風(fēng)散組小鼠脾淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化的A570值與正常對照組差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P0.05）;而Cy
5、+中藥免疫調(diào)節(jié)劑組和Cy+玉屏風(fēng)散組小鼠脾淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化的A570值明顯高于正常對照組（P0.05）,且Cy+中藥免疫調(diào)節(jié)劑組對于淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化的促進作用優(yōu)于Cy+玉屏風(fēng)散組（P0.05）。另外,在PHA的刺激下,各組淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化的A570值都有了顯著提高,且以Cy+中藥免疫調(diào)節(jié)劑組及Cy+玉屏風(fēng)散組最為明顯（P0.05,表1）。表1各組小鼠脾淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化結(jié)果（略）注:同一列數(shù)值標(biāo)有相同字母者之間無統(tǒng)計學(xué)意義;標(biāo)有不同字母者之間有統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05),下表同.表2含藥血清對小鼠脾淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化的影響（略）2.2含藥血清對小鼠脾淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化的影響在健康小鼠脾淋巴細(xì)胞的轉(zhuǎn)化試驗中,無論加入
6、濃度為50mL/L還是100mL/L的各試驗組血清,Cy+中藥組及Cy+玉屏風(fēng)散組A570值明顯高于其他組（P0.05）;Cy對照組A570值明顯低于正常對照組（P0.05）;單純的中藥組和玉屏風(fēng)散組A570值與正常對照組差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P0.05）,但均高于Cy組血清（P0.05）。說明含藥血清對免疫功能異常小鼠具有明顯的免疫調(diào)節(jié)功能,且在50mL/L血清濃度時Cy+中藥組血清的促進淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化作用優(yōu)于Cy+玉屏風(fēng)散組（P0.05）。50mL/L血清濃度與100mL/L血清濃度相比,有統(tǒng)計學(xué)差異（P0.05,表2）。3討論目前,檢測淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化最常用的方法是同位素?fù)饺敕ê蚆TT法
7、,實驗證明兩種方法具有顯著的相關(guān)性4。本試驗中選用MTT法研究中藥免疫調(diào)節(jié)劑對小鼠細(xì)胞免疫功能影響。多次重復(fù)試驗結(jié)果表明,在對試驗各影響因素進行充分優(yōu)化的基礎(chǔ)上,MTT法的確簡便實用,重復(fù)性好?！坝衿溜L(fēng)散”為扶正固表的經(jīng)典方劑,近年來大量的體內(nèi)外研究表明其對免疫系統(tǒng)存在著較為廣泛的影響5。玉屏風(fēng)散含藥血清具有明顯活化小鼠白細(xì)胞和腹腔巨噬細(xì)胞作用,對脾淋巴細(xì)胞增殖、IL2產(chǎn)生有促進作用,對NK細(xì)胞的活性有明顯的增強作用6;因此我們的試驗選用“玉屏風(fēng)散”為對照
