改進(jìn)菊花中綠原酸含量的測(cè)定方法

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1、改進(jìn)菊花中綠原酸含量的測(cè)定方法【關(guān)鍵詞】菊花；,,高效液相色譜；,,綠原酸　　摘要：目的對(duì)菊花中綠原酸含量的測(cè)定方法進(jìn)行改進(jìn)。方法采用高效液相色譜（HPLC）法測(cè)定綠原酸含量。結(jié)果菊花中綠原酸的含量按《中國(guó)藥典》2005年版Ⅰ部方法實(shí)驗(yàn)，樣品提取方法復(fù)雜，含量有損失，誤差較大。結(jié)論將含量測(cè)定方法改進(jìn)后，具有樣品溶液提取方法簡(jiǎn)便、含量準(zhǔn)確可靠、分離效果好、靈敏度高、穩(wěn)定性好等優(yōu)點(diǎn)，為標(biāo)準(zhǔn)的修訂提供可行的依據(jù)?！　￡P(guān)鍵詞：菊花；高效液相色譜；綠原酸　　菊花為菊科植物菊ChrysanthemummorifoliumRamat.的干燥頭狀花序。藥材按產(chǎn)地和加工方法不同，分為“亳菊”“滁菊”“貢菊

2、”“杭菊”。本文分別對(duì)亳菊和杭菊進(jìn)行了含量分析，改進(jìn)后的方法（第2法）具有樣品溶液提取方法簡(jiǎn)便、含量準(zhǔn)確可靠等優(yōu)特點(diǎn)?！　?器材　　氯仿、磷酸均為分析純；甲醇、乙腈均為色譜純；Agilent1100HPLC化學(xué)工作站；MettlerAE240電子天平；樣品由湖北省宜昌市眾生醫(yī)藥公司和湖北省紅安縣中醫(yī)醫(yī)院提供，經(jīng)宜昌市藥品檢驗(yàn)所鑒定為“杭菊”，湖北某企業(yè)提供的菊花經(jīng)鑒定為“亳菊”；綠原酸對(duì)照品（由中檢所提供，供含量測(cè)定用，批號(hào)為110753200212）。　　2方法與結(jié)果　　2.1第1法按《中國(guó)藥典》2005年版Ⅰ部方法實(shí)驗(yàn)?！　?.1.1色譜分析條件色譜柱為NucleosilC18(10

3、μm,4.6mm×250mm)；柱溫25℃；流動(dòng)相：0.1mol/L磷酸二氫鈉緩沖液［取磷酸二氫鈉（NaH2PO4・2H2O）15.6g，加水至1000ml，制成0.1mol/L的溶液，加入磷酸適量，使pH值為2.7］甲醇（70∶30）；檢測(cè)波長(zhǎng)328nm；進(jìn)樣量20μl；流速1.0ml/min；AUFS=0.12s?！　?.1.2對(duì)照品溶液的制備精密稱取綠原酸對(duì)照品適量，置棕色量瓶中，加水制成每毫升含0.1mg的溶液，即得（10℃以下保存）?！　?.1.3供試品溶液的制備取樣品粉末（過(guò)1號(hào)篩）約1g［同時(shí)另取樣品粉末測(cè)定水分（附錄ⅨH第1法）］，精密稱定，置錐形瓶中，精密

4、加入甲醇50ml，稱定重量，加熱回流2h，冷卻，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，精密量取續(xù)濾液10ml，蒸干，殘?jiān)勇确?ml，浸漬3min，棄去氯仿液，殘?jiān)鼡]去氯仿，加水適量使溶解，并轉(zhuǎn)移至5ml量瓶中，加水至刻度，搖勻，用微孔濾膜（0.45μm）濾過(guò)，即得（應(yīng)于當(dāng)日測(cè)定）?！　?.2第2法（改進(jìn)后的方法）　　2.2.1色譜分析條件流動(dòng)相：乙腈0.4%磷酸溶液（12∶88），其余同第1法。　　2.2.2對(duì)照品溶液的制備精密稱取綠原酸對(duì)照品適量，置棕色量瓶中，加50%甲醇制成每毫升含0.1mg的溶液，即得（10℃以下保存）?！　?.2.3供試品溶液的制備取樣品粉末約0.5g

5、［同時(shí)另取樣品粉末測(cè)定水分（附錄ⅨH第1法）］，精密稱定，置錐形瓶中，精密加入50%甲醇50ml，稱定重量，超聲處理30min，放冷，再稱定重量，用50%甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，精密量取續(xù)濾液5ml，置25ml棕色量瓶中，加50%甲醇至刻度，搖勻，即得?！　?.3系統(tǒng)適應(yīng)性實(shí)驗(yàn)　　2.3.1第1法按《中國(guó)藥典》2005年版Ⅰ部方法實(shí)驗(yàn)。理論板數(shù)：本文依法對(duì)樣品和對(duì)照品進(jìn)行了處理，并按上述條件進(jìn)行色譜測(cè)定，其理論板數(shù)為4495，符合《中國(guó)藥典》規(guī)定。重復(fù)性實(shí)驗(yàn)：取新配制的綠原酸對(duì)照品溶液，進(jìn)樣5次，所得峰面積積分值為5753，5748，5747，5750，5747，RSD=0.04

6、%(n=5)。2.3.2第2法（改進(jìn)后的方法）理論板數(shù)：本文依法對(duì)樣品和對(duì)照品進(jìn)行了處理，并按上述條件進(jìn)行色譜測(cè)定，其理論板數(shù)為5241，符合藥典規(guī)定。重復(fù)性實(shí)驗(yàn)：取新配制的綠原酸對(duì)照品溶液，進(jìn)樣5次，所得峰面積積分值為5908，5891，5893，5889，5885，RSD=0.15%(n=5)?！　?.4樣品測(cè)定結(jié)果　　2.4.1第1法將樣品依法處理。結(jié)果見(jiàn)表1。　　表13批菊花樣品的測(cè)定結(jié)果(略)　　2.4.2第2法（改進(jìn)后的方法）將樣品依法處理。結(jié)果見(jiàn)表2?！　”?3批菊花樣品的測(cè)定結(jié)果(略)　　2.5回收率實(shí)驗(yàn)(第2法)精密稱取眾生藥業(yè)提供的菊花樣品約0.5g，定量加入適量的綠

7、原酸對(duì)照品，下同供試品項(xiàng)下操作，在上述色譜條件下測(cè)定，測(cè)得平均回收率為99.9%。結(jié)果見(jiàn)表3?！　”?綠原酸回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果(略)　　3討論　　3.1菊花按《中國(guó)藥典》的方法測(cè)定綠原酸的含量，樣品溶液的提取比較復(fù)雜，含量損失大，特別是從蒸發(fā)皿中用水洗滌定容至5ml量瓶中，誤差大，測(cè)出的含量要比實(shí)際的含量低?！　?.2菊花按《中國(guó)藥典》的方法測(cè)定綠原酸的含量，其色譜條件不是很理想，流動(dòng)相的比例要改為80∶20，效果會(huì)更好，特別對(duì)質(zhì)量很差