egcg調(diào)節(jié)p53和egfr信號(hào)通路抑制人類(lèi)肺癌細(xì)胞的分子機(jī)制研究

《egcg調(diào)節(jié)p53和egfr信號(hào)通路抑制人類(lèi)肺癌細(xì)胞的分子機(jī)制研究》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線(xiàn)閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫(kù)。

1、萬(wàn)方數(shù)據(jù)中圖分類(lèi)號(hào)——UDC．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．——博士學(xué)位論文學(xué)校代碼!Q5三三密級(jí)公玨EGCG調(diào)節(jié)p53和EGFR信號(hào)通路抑制人類(lèi)肺癌細(xì)胞的分子機(jī)制研究MolecularmechanismofwhichEpigallocatechingallate‘rdail)itshuman‘ungcancercellsviaregulatingp53mdlnlalItShumanlunlzantrcellsV1aatlnl乏andEGFRsignalpathway作者姓名：學(xué)科專(zhuān)業(yè)：研究方向：學(xué)院

2、(系、所)：指導(dǎo)教師：金龍玉臨床醫(yī)學(xué)外科學(xué)(心胸外科)湘雅二醫(yī)院喻風(fēng)雷教授萬(wàn)方數(shù)據(jù)博士學(xué)位論文原創(chuàng)性聲明學(xué)位論文原創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明，所呈交的學(xué)位論文是本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果。盡我所知，除了論文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫(xiě)過(guò)的研究成果，也不包含為獲得中南大學(xué)或其他教育機(jī)構(gòu)的學(xué)位或證書(shū)而使用過(guò)的材料。與我共同工作的同志對(duì)本研究所作的貢獻(xiàn)均已在論文中作了明確的說(shuō)明。申請(qǐng)學(xué)位論文與資料若有不實(shí)之處，本人承擔(dān)一切相關(guān)責(zé)任。儲(chǔ)虢聳吼蘭年上月掣日學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書(shū)本學(xué)位論文作者

3、和指導(dǎo)教師完全了解中南大學(xué)有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定：即學(xué)校有權(quán)保留并向國(guó)家有關(guān)部門(mén)或機(jī)構(gòu)送交學(xué)位論文的復(fù)印件和電子版；本人允許本學(xué)位論文被查閱和借閱：學(xué)?？梢詫⒈緦W(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行檢索，可以采用復(fù)印、縮印或其它手段保存和匯編本學(xué)位論文。保密論文待解密后適應(yīng)本聲明。作者答名．善砷k作者簽名：二芝習(xí)!∑吼衛(wèi)年!月粵日導(dǎo)師簽名孽絲喻丑年!月孕日萬(wàn)方數(shù)據(jù)博士學(xué)位論文中文摘要摘要背景：肺癌是人類(lèi)腫瘤的頭號(hào)殺手，其復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移是肺癌患者五年生存率得不到有效改善的主要原因。腫瘤抑制基因的過(guò)度失活與癌基因的異?；罨诜?/p>

4、癌的發(fā)生發(fā)展中起著至關(guān)重要的作用。超過(guò)60％的肺癌中出現(xiàn)了腫瘤抑制基因p53的突變與功能異常；超過(guò)25％的肺癌中檢測(cè)到了原癌基因c．erbBl(EGFR)的擴(kuò)增。近年來(lái)，腫瘤的化學(xué)預(yù)防日益受到人們的關(guān)注，綠茶多酚EGCG是目前已知的最有效的天然抗腫瘤化合物之一。雖然已有研究證實(shí)EGCG能活化p53并能抑制EGFR信號(hào)通路，但其分子機(jī)制還不清楚。鑒于此，有必要對(duì)EGCG調(diào)節(jié)p53及EGFR信號(hào)通路抗肺腫瘤的分子機(jī)制作進(jìn)一步研究。目的：首先以p53的翻譯后修飾為切入點(diǎn)，通過(guò)分析p53蛋白的穩(wěn)定性、轉(zhuǎn)錄活性及其負(fù)性調(diào)節(jié)因子MDM2對(duì)p

5、53的降解作用，為EGCG誘導(dǎo)p53蛋白活化的分子機(jī)制提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。接著，以EGFR及其介導(dǎo)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路為靶標(biāo)，從EGFR激酶活性和轉(zhuǎn)錄活性入手，分析EGCG在多個(gè)層面對(duì)EGFR信號(hào)通路抑制的分子機(jī)制，為EGCG的肺癌預(yù)防與潛在的臨床治療應(yīng)用提供理論依據(jù)。方法：首先，通過(guò)軟瓊脂集落形成實(shí)驗(yàn)和慢病毒介導(dǎo)的基因沉默技術(shù)，確認(rèn)EGCG抗肺腫瘤的效果部分依賴(lài)于p53蛋白活性。接著，利用westernblot、熒光素酶雙報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)等方法，從p53蛋白穩(wěn)定性，胞漿胞核分布及其反式激活能力等方面，證實(shí)EGCG誘導(dǎo)p53蛋白的積聚與活化。通

6、過(guò)免疫共沉淀分析EGCG對(duì)MDM2與p53的結(jié)合能力及p53泛素化降解的影響。Westernblot分析EGCG對(duì)EGF誘導(dǎo)萬(wàn)方數(shù)據(jù)博士學(xué)位論文中文摘要的EGFR信號(hào)通路活化的影響，檢測(cè)EGCG對(duì)EGFR總蛋白、胞膜、胞核表達(dá)的影響及其反式激活能力的改變，再應(yīng)用Westernbid分析EGFR靶基因cyclinDl的表達(dá)。最后，流式細(xì)胞術(shù)分析EGCG對(duì)肺癌細(xì)胞周期行進(jìn)的影響。結(jié)果：1．Softwar結(jié)果表明，EGCG對(duì)p53野生型肺癌細(xì)胞具有更顯著的抑制效果，基因沉默p53表達(dá)能增強(qiáng)肺癌細(xì)胞對(duì)EGCG的耐受能力。2．Westem

7、blot結(jié)果顯示，EGCG延長(zhǎng)p53和MDM2的半衰期，并劑量依賴(lài)性上調(diào)p53Serl5和Ser20磷酸化及其下游靶基因MDM2和p21的表達(dá)，促進(jìn)p53的核積聚。3．熒光素酶雙報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)結(jié)果提示，EGCG劑量依賴(lài)性上調(diào)p53的反式激活能力，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p

8、，EGCG劑量依賴(lài)性和時(shí)間依賴(lài)性抑制EGFR的總蛋白、胞膜和胞核表達(dá)，并抑制EGFR的下游靶基因cyclinDl的表達(dá)。7．EGCG劑量依賴(lài)性抑制EGFR的反式激活能力，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p