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1、強(qiáng)力霉素對移植肺缺血【摘要】目的探討外源性基質(zhì)金屬蛋白酶(matrixmetalloprotEinases，MMPs)抑制劑強(qiáng)力霉素在移植肺缺血-再灌注損傷中細(xì)胞凋亡的影響。方法建立大鼠自體左肺肺缺血再灌注模型，16只SD受體大鼠隨機(jī)分為兩組:缺血再灌注組和強(qiáng)力霉素組，用免疫組化方法觀察移植肺Bcl-2、Bax和Caspase-3表達(dá)情況，并取肺組織平滑肌細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，采用熒光技術(shù)測定肺組織細(xì)胞凋亡。結(jié)果肺缺血再灌注后，與對照組相比，強(qiáng)力霉素組移植肺Bax和Caspase-3表達(dá)明顯降低(P<0.01)，Bcl-2的表達(dá)無明顯
2、變化(P>0.05)，但Bcl-2/Bax比例升高；熒光圖片顯示，強(qiáng)力霉素組的細(xì)胞凋亡明顯較對照組減少。結(jié)論強(qiáng)力霉素可能通過下調(diào)Bax、Caspase-3表達(dá)，提高Bcl-2/Bax比例而抑制肺缺血再灌注損傷的細(xì)胞凋亡，并通過降低基底膜的降解，減輕肺水腫，達(dá)到肺保護(hù)作用。【關(guān)鍵詞】肺；缺血-再灌注損傷；強(qiáng)力霉素【Abstract】ObjectiveToinvestigatetheeffectofexogenousmatrixmetalloprotEInaseinhibitoronpneumocyteapoptosisinlun
3、gischemia-reperfusioninjuryandthemechanism.MethodsModelsofischemia-reperfusionlunginjuryinSDratslydividedintoteasuredbyimmunohistochemistrymethodsafter2htransplantation.Apoptoticmorphologicalchangesicroscope.ResultsTheproteinlevelexpressionofBaxandCaspase-3entia-reperf
4、usioninjury.肺移植作為治療多種終末期肺疾病的有效方法，于1983年在臨床上首次獲得成功。但越來越多的證據(jù)顯示，供肺/移植肺仍然易于受到保存損傷(缺血)和再灌注損傷，導(dǎo)致移植后早期嚴(yán)重移植肺功能不全的發(fā)生率高達(dá)20%，移植受者術(shù)后ICU監(jiān)護(hù)時(shí)間延長，術(shù)后早期死亡率增加［1］，并與移植后晚期較高的閉塞性支氣管炎（obliterativebronchitis，OB）發(fā)生率相關(guān)。因此，研究低溫肺保存后再灌注損傷的機(jī)制，改善移植肺功能，仍然是肺移植領(lǐng)域中所急需解決的重點(diǎn)課題之一。眾多研究表明，心肌細(xì)胞凋亡是肺缺血再灌注損傷的重要表
5、現(xiàn)形式。細(xì)胞凋亡受多種因素的調(diào)控，尤其是凋亡調(diào)控基因Bcl-2、Bax和凋亡執(zhí)行基因Caspase-3［2，3］。本研究旨在通過建立大鼠自體左肺肺缺血再灌注模型移植模型，探討外源性基質(zhì)金屬蛋白酶(matrixmetalloproteinases，MMPs)抑制劑強(qiáng)力霉素在移植肺缺血-再灌注損傷中細(xì)胞凋亡的影響。1材料與方法1.1實(shí)驗(yàn)分組、模型建立和取樣1.1.1實(shí)驗(yàn)分組健康成年雄性Sprague-Dain、冷缺血3h、熱缺血30min和不同時(shí)間的再灌注處理；B組（n=8）：治療組，術(shù)前一次性灌胃，連續(xù)7天，缺血90min，再灌2h于
6、左肺門開放前10min經(jīng)頸靜脈注入強(qiáng)力霉素30mg/(kg·d)，其余操作同IR組。A組和B組給予等體積的生理鹽水。1.1.2大鼠自體左肺模擬原位移植模型的建立術(shù)前30min肌注阿托品（0.5mg/kg），30g/L的戊巴比妥鈉30mg/kg腹腔內(nèi)注射，麻醉成功后，將大鼠右側(cè)斜位固定于手術(shù)臺上。氣管切開插管連接微型動物呼吸機(jī)。輔助呼吸參數(shù)為：潮氣量10ml/kg，呼吸頻率75次/min，吸入氧濃度FiO21.0，呼氣末正壓2.0cmH2O。右側(cè)頸動脈插管，用于采集標(biāo)本、監(jiān)測血壓；右側(cè)頸靜脈穿刺備用；尾靜脈微量注射泵持續(xù)補(bǔ)液，速度為4
7、.0ml/(kg·h)。經(jīng)左第5肋間前外側(cè)切口進(jìn)胸并橫斷胸骨，打開縱隔。頸靜脈注射肝素鈉（375.０U/kg）后，剝離左肺門，離斷左下肺韌帶；經(jīng)左向右游離右肺動脈、靜脈及主支氣管，預(yù)置阻斷帶。然后用一塑料袋（內(nèi)徑約2.5cm）套住左全肺，并在肺門處形成反折，連同塑料袋一起用無創(chuàng)傷鉗于吸氣末阻斷左肺門根部［1，2］，此時(shí)潮氣量減至8.0ml/kg，呼吸頻率100次/min，其他參數(shù)不變。30min后，在反折的塑料袋加入冷生理鹽水及小冰塊，把套有塑料袋的左肺上提至切口平面（勿與周圍臟器接觸）。袋內(nèi)置一溫度計(jì)使之保持在4℃左右。冷缺血3h
8、后去除冷鹽水，使左肺又轉(zhuǎn)變?yōu)闊崛毖?30min后松開無創(chuàng)傷鉗，形成再灌注。同時(shí)頸靜脈給予魚精蛋白（2.4～3.0mg/kg）。待血壓、呼吸穩(wěn)定后（肉眼上，左肺變得紅潤，約需10min），夾閉右肺門，形成左單肺再灌注。1.1.3大鼠肺血
