血管性癡呆大鼠學(xué)習(xí)記憶障礙及發(fā)病機制論文

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1、血管性癡呆大鼠學(xué)習(xí)記憶障礙及發(fā)病機制論文姜彩肖張麗梅杭景仙劉殿武【摘要】目的研究血管性癡呆(VD)大鼠學(xué)習(xí)記憶障礙及發(fā)病機制。方法4血管阻斷法制作模型，Morris水迷宮法檢測學(xué)習(xí)記憶能力，免疫組化法觀察Bcl2和Bax表達，流式細胞術(shù)檢測海馬神經(jīng)細胞凋亡率，亞甲藍比色法檢測血清中H2S含量。結(jié)果模型組大鼠學(xué)習(xí)記憶能力明顯減退。Bcl2/Bax在缺血再灌注(I/R)開始時升高，隨后開始下降。模型組大鼠海馬神經(jīng)細胞凋亡率明顯增加。模型組大鼠血清中H2S含量明顯減少。血清H2S含量與海馬神經(jīng)細胞凋亡率間呈明顯負相關(guān)。結(jié)論VD可導(dǎo)致學(xué)習(xí)記憶障礙，海馬神經(jīng)細胞凋亡和血清中H2S含量減少

2、;海馬神經(jīng)細胞凋亡程度可能與內(nèi)源性H2S生成減少有關(guān)?！娟P(guān)鍵詞】血管性癡呆;學(xué)習(xí)記憶;免疫組化;流式細胞術(shù);硫化氫血管性癡呆(VD)是老年期癡呆的主要類型之一，它是由一系列腦血管因素(缺血、出血、急慢性缺氧性腦血管病等)導(dǎo)致腦組織損害引起的以認知功能障礙為特征的癡呆綜合征〔1〕.freell和4%多聚甲醛500ml，取出腦組織，石蠟包埋切片，用于免疫組化顯示Bcl2、Bax及蘇木素伊紅(HE)染色。1.3學(xué)習(xí)記憶能力的測定Morris水迷宮檢測〔3〕：實驗開始于VD術(shù)后4l/kg體重)腹腔注射麻醉后，快速開胸暴露心臟，心尖取血4～5ml，分離血清，用于血清H2S含量測定;然后斷

3、頭處死，并立即在冰臺上開顱，迅速分離大鼠海馬，用70%酒精固定，4℃冰箱保存過夜，用于流式細胞術(shù)檢測。1.5HE染色切片常規(guī)脫蠟至水→1%鹽酸酒精分化→伊紅染色2min→切片常規(guī)梯度酒精脫水→二甲苯Ⅰ→二甲苯Ⅱ→中性樹膠封固。1.6免疫組化染色(SP法)Bax兔抗鼠多克隆抗體，Bcl2兔抗鼠多克隆抗體(SantaCruz公司生產(chǎn))。1.7流式細胞術(shù)檢測采用美國BeckmanCoulter公司生產(chǎn)的EpicsXLⅡ型流式細胞儀。1.8血清中H2S含量的檢測亞甲藍分光光度法。1.9統(tǒng)計學(xué)處理用SPSS13.0統(tǒng)計軟件，采用單因素方差分析，兩兩比較采用SNK法。2結(jié)果2.1學(xué)習(xí)記憶能

4、力檢測結(jié)果各組大鼠在迷宮各入水點搜索平臺的結(jié)果見表1，隨著訓(xùn)練天數(shù)的增加，各組大鼠的逃避潛伏期均縮短，第2天I/R720h組與正常組和假手術(shù)組比較逃避潛伏期明顯延長(P0.01);正常組和假手術(shù)組逃避潛伏期差異不顯著(P0.05)。2.2VD大鼠病理形態(tài)學(xué)結(jié)果HE染色后，神經(jīng)細胞胞漿呈淡紅色，核呈藍黑色。假手術(shù)組大鼠海馬CA1區(qū)神經(jīng)元排列整齊、密集，細胞完整，結(jié)構(gòu)正常，胞漿豐富，膠質(zhì)細胞無增生;細胞核呈圓形、橢圓形，無變性，無固縮或溶解現(xiàn)象。VD模型組海馬CA1區(qū)神經(jīng)元排列紊亂，神經(jīng)元變性，體積變小，胞核與胞漿界限不清，核固縮成三角形或不規(guī)則形，而且隨I/R時間的延長，變性神經(jīng)元數(shù)

5、目越多，見圖1。表1各組逃避潛伏期比較2.3凋亡蛋白表達結(jié)果2.3.1VD大鼠模型海馬CA1區(qū)Bcl2表達VD模型組I/R2hBcl2蛋白平均OD值開始明顯上調(diào)，I/R8h達到高峰，之后隨I/R時間的延長開始下降，但I/R24h組仍高于假手術(shù)組。假手術(shù)組與I/R不同時間點組間，Bcl2的表達情況均有顯著差異(P0.01)(表2)。2.3.2VD大鼠模型海馬CA1區(qū)Bax的表達I/R早期Bax在海馬CA1區(qū)的表達明顯增強，隨著再灌注時間的延長，其表達量不斷增加，I/R72～168h達高峰。假手術(shù)組與I/R不同時間點組之間，Bax的表達均有顯著差異(P0.01)(表2)。2.3.

6、3Bcl2/Bax比率變化隨I/R時間的延長，Bcl2/Bax的比率逐漸降低(表2)。表2VD大鼠Bcl2、Bax的表達水平與假手術(shù)組比較：1)P0.05，2)P0.012.4流式細胞術(shù)檢測海馬神經(jīng)細胞凋亡率結(jié)果隨著I/R時間的延長，大鼠海馬神經(jīng)細胞凋亡率逐漸增高，其中I/R2h組凋亡率最低，I/R168h組凋亡率最高。VD模型各時間組與假手術(shù)組比較，海馬神經(jīng)細胞凋亡率明顯增加(P0.01);I/R不同時間組間兩兩比較，各組間海馬神經(jīng)細胞凋亡率均差異顯著(P0.01)，見表3。2.5血清H2S含量檢測結(jié)果隨著I/R時間的延長，大鼠血清H2S含量呈現(xiàn)直線降低趨勢，其中IR2h組

7、血清H2S含量最高，I/R168h組血清H2S含量最低。VD模型各時間組與正常組和假手術(shù)組比較，血清H2S含量明顯減少(P0.01);I/R不同時間組間兩兩比較，血清H2S含量均差異顯著(P0.01);正常組和假手術(shù)組血清H2S含量無顯著差異(P0.05)，見表3。2.6血清H2S含量與海馬神經(jīng)細胞凋亡率相關(guān)分析隨著血清H2S含量的降低，海馬神經(jīng)細胞凋亡率逐漸升高，兩者呈現(xiàn)明顯的負相關(guān)，回歸方程為：y=-0.135x+12.068，相關(guān)系數(shù)r=-0.861(P0.01