血管性癡呆大鼠學(xué)習(xí)記憶障礙及發(fā)病機(jī)制

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1、血管性癡呆大鼠學(xué)習(xí)記憶障礙及發(fā)病機(jī)制作者：姜彩肖張麗梅杭景仙劉殿武【摘要】目的研究血管性癡呆(VD)大鼠學(xué)習(xí)記憶障礙及發(fā)病機(jī)制。方法4血管阻斷法制作模型，Morris水迷宮法檢測(cè)學(xué)習(xí)記憶能力，免疫組化法觀察Bcl2和Bax表達(dá)，流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)海馬神經(jīng)細(xì)胞凋亡率，亞甲藍(lán)比色法檢測(cè)血清中H2S含量。結(jié)果模型組大鼠學(xué)習(xí)記憶能力明顯減退。Bcl2/Bax在缺血再灌注(I/R)開(kāi)始時(shí)升高，隨后開(kāi)始下降。模型組大鼠海馬神經(jīng)細(xì)胞凋亡率明顯增加。模型組大鼠血清中H2S含量明顯減少。血清H2S含量與海馬神經(jīng)細(xì)胞凋亡率間呈明顯負(fù)相關(guān)。結(jié)論VD可導(dǎo)致學(xué)習(xí)記憶障礙，海馬神經(jīng)細(xì)胞

2、凋亡和血清中H2S含量減少;海馬神經(jīng)細(xì)胞凋亡程度可能與內(nèi)源性H2S生成減少有關(guān)?！娟P(guān)鍵詞】血管性癡呆;學(xué)習(xí)記憶;免疫組化;流式細(xì)胞術(shù);硫化氫血管性癡呆(VD)是老年期癡呆的主要類型之一，它是由一系列腦血管因素(缺血、出血、急慢性缺氧性腦血管病等)導(dǎo)致腦組織損害引起的以認(rèn)知功能障礙為特征的癡呆綜合征〔1〕，不僅給病人帶來(lái)長(zhǎng)期痛苦，嚴(yán)重影響其生活質(zhì)量，而且給家庭、社會(huì)造成沉重負(fù)擔(dān)，因此研究VD的發(fā)病機(jī)制以指導(dǎo)其防治具有很高的社會(huì)價(jià)值和現(xiàn)實(shí)意義。H2S是第三類氣體信號(hào)分子，廣泛參與機(jī)體的多種生理和病理過(guò)程，為進(jìn)一步了解其在VD發(fā)病中的作用，本研究觀察大腦缺血/再灌

3、注(I/R)不同時(shí)間對(duì)大鼠學(xué)習(xí)記憶能力的影響、血清中H2S含量改變及海馬CA1區(qū)神經(jīng)細(xì)胞凋亡情況，從行為學(xué)、細(xì)胞凋亡及內(nèi)源性H2S表達(dá)量及其相互關(guān)系等方面，探討VD的發(fā)病機(jī)制，為其防治提供理論依據(jù)?！　?材料與方法　　1.1動(dòng)物與分組健康orris水迷宮檢測(cè)〔3〕：實(shí)驗(yàn)開(kāi)始于VD術(shù)后4l/kg體重)腹腔注射麻醉后，快速開(kāi)胸暴露心臟，心尖取血4～5ml，分離血清，用于血清H2S含量測(cè)定;然后斷頭處死，并立即在冰臺(tái)上開(kāi)顱，迅速分離大鼠海馬，用70%酒精固定，4℃冰箱保存過(guò)夜，用于流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)?！　?.5HE染色切片常規(guī)脫蠟至水→1%鹽酸酒精分化→伊紅染色2mi

4、n→切片常規(guī)梯度酒精脫水→二甲苯Ⅰ→二甲苯Ⅱ→中性樹(shù)膠封固?！　?.6免疫組化染色(SP法)Bax兔抗鼠多克隆抗體，Bcl2兔抗鼠多克隆抗體(SantaCruz公司生產(chǎn))?！　?.7流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)采用美國(guó)BeckmanCoulter公司生產(chǎn)的EpicsXLⅡ型流式細(xì)胞儀?！　?.8血清中H2S含量的檢測(cè)亞甲藍(lán)分光光度法?！　?.9統(tǒng)計(jì)學(xué)處理用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件，采用單因素方差分析，兩兩比較采用SNK法?！　?結(jié)果　　2.1學(xué)習(xí)記憶能力檢測(cè)結(jié)果各組大鼠在迷宮各入水點(diǎn)搜索平臺(tái)的結(jié)果見(jiàn)表1，隨著訓(xùn)練天數(shù)的增加，各組大鼠的逃避潛伏期均縮短，第2天I/R72

5、0h組與正常組和假手術(shù)組比較逃避潛伏期明顯延長(zhǎng)(P<0.01);正常組和假手術(shù)組逃避潛伏期差異不顯著(P>0.05)?！　?.2VD大鼠病理形態(tài)學(xué)結(jié)果HE染色后，神經(jīng)細(xì)胞胞漿呈淡紅色，核呈藍(lán)黑色。假手術(shù)組大鼠海馬CA1區(qū)神經(jīng)元排列整齊、密集，細(xì)胞完整，結(jié)構(gòu)正常，胞漿豐富，膠質(zhì)細(xì)胞無(wú)增生;細(xì)胞核呈圓形、橢圓形，無(wú)變性，無(wú)固縮或溶解現(xiàn)象。VD模型組海馬CA1區(qū)神經(jīng)元排列紊亂，神經(jīng)元變性，體積變小，胞核與胞漿界限不清，核固縮成三角形或不規(guī)則形，而且隨I/R時(shí)間的延長(zhǎng)，變性神經(jīng)元數(shù)目越多，見(jiàn)圖1?！”?各組逃避潛伏期比較　　2.3凋亡蛋白表達(dá)結(jié)果　　2.

6、3.1VD大鼠模型海馬CA1區(qū)Bcl2表達(dá)VD模型組I/R2hBcl2蛋白平均OD值開(kāi)始明顯上調(diào)，I/R8h達(dá)到高峰，之后隨I/R時(shí)間的延長(zhǎng)開(kāi)始下降，但I(xiàn)/R24h組仍高于假手術(shù)組。假手術(shù)組與I/R不同時(shí)間點(diǎn)組間，Bcl2的表達(dá)情況均有顯著差異(P<0.01)(表2)。　　2.3.2VD大鼠模型海馬CA1區(qū)Bax的表達(dá)I/R早期Bax在海馬CA1區(qū)的表達(dá)明顯增強(qiáng)，隨著再灌注時(shí)間的延長(zhǎng)，其表達(dá)量不斷增加，I/R72～168h達(dá)高峰。假手術(shù)組與I/R不同時(shí)間點(diǎn)組之間，Bax的表達(dá)均有顯著差異(P<0.01)(表2)?！　?.3.3Bcl2/B

7、ax比率變化隨I/R時(shí)間的延長(zhǎng)，Bcl2/Bax的比率逐漸降低(表2)。表2VD大鼠Bcl2、Bax的表達(dá)水平與假手術(shù)組比較：1)P<0.05，2)P<0.01　　2.4流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)海馬神經(jīng)細(xì)胞凋亡率結(jié)果隨著I/R時(shí)間的延長(zhǎng)，大鼠海馬神經(jīng)細(xì)胞凋亡率逐漸增高，其中I/R2h組凋亡率最低，I/R168h組凋亡率最高。VD模型各時(shí)間組與假手術(shù)組比較，海馬神經(jīng)細(xì)胞凋亡率明顯增加(P<0.01);I/R不同時(shí)間組間兩兩比較，各組間海馬神經(jīng)細(xì)胞凋亡率均差異顯著(P<0.01)，見(jiàn)表3?！　?.5血清H2S含量檢測(cè)結(jié)果隨著I/R時(shí)間的延長(zhǎng)，大

8、鼠血清H2S含量呈現(xiàn)直線降低趨勢(shì)，其中IR2h組血清