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《黃曲霉毒素的檢測方法研究進(jìn)展(綜述).doc》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫。
1、黃曲霉毒素的檢測方法研究進(jìn)展(綜述)劉作新，高軍俠(1．中國科學(xué)院沈陽應(yīng)用生態(tài)研究所，沈陽110016；2．中國科學(xué)院研究生院，北京100039)摘要：黃曲霉毒素(aflatoxin，AFT)是一類有毒致癌化合物，污染糧食及其制品，給人類健康造成嚴(yán)重威脅。本文對目前用于黃曲霉毒素的檢測方法進(jìn)行了綜述。在對薄層層析法、高效液相色譜法、微柱法及酶聯(lián)免疫吸附法等檢測方法綜合分析的基礎(chǔ)上，評述了上述方法的優(yōu)劣和適用條件。關(guān)鍵詞：黃曲霉毒素；檢測方法；進(jìn)展黃曲霉毒素(aflatoxin，AFT)主要是由黃曲霉和寄生曲霉等真菌產(chǎn)生的一類有毒次生代謝物。在世界不同地區(qū)都發(fā)現(xiàn)了這些真
2、菌大量存在于供人類食用的食品中，黃曲霉毒素污染已導(dǎo)致嚴(yán)重的食品安全問題[1,2]。自20世紀(jì)60年代以來，有關(guān)黃曲霉毒素的危害被大量報道，以致黃曲霉毒素已成為最受人們關(guān)注的一種真菌毒素[3]。因此，尋求準(zhǔn)確、快速、簡便的檢測方法，對黃曲霉毒素進(jìn)行高效的定性定量分析，是黃曲霉毒素研究的一個重要方面。1.黃曲霉毒素研究概況迄今為止，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)的黃曲霉毒素至少包含黃曲霉毒素B1、B2、G1、G2、M1、M2等l7種結(jié)構(gòu)相似且特征已知的化合物，其結(jié)構(gòu)特征為都含有一個雙呋喃環(huán)和一個氧雜萘鄰?fù)?。黃曲霉毒素的理化性質(zhì)比較穩(wěn)定，如B1在高溫200℃、紫外線照射下，都不能使之破壞，加熱到
3、B1的熔點(268～269~C)才開始分解；在酸性溶液中，B1也很穩(wěn)定，在pH1～3的強(qiáng)酸性溶液中則稍有分解【2】。黃曲霉毒素的毒性為氰化鉀的l0倍，砒霜的68倍，能引起人急性中毒死亡，與人的肝癌有密切關(guān)系，能使家畜、家禽及多種實驗動物誘發(fā)癌癥，其中B1、B2、G1、G2是最主要的毒素物質(zhì)，而B1是自然發(fā)生潛力最大的一種毒素【4,5】。2黃曲霉毒素的檢測方法黃曲霉毒素的檢測方法從最初以薄層層析法為主，發(fā)展到高效液相色譜法、微柱法、酶聯(lián)免疫吸附法等多種方法普遍應(yīng)用，其進(jìn)展與新的化學(xué)檢測手段和新儀器的出現(xiàn)密不可分。這些新方法、新手段的快速應(yīng)用，為黃曲霉毒素的檢測提供了更廣
4、泛的選擇余地，適應(yīng)了不同的檢測目的和要求[6].2．1薄層層析法(TLC)薄層層析法是測定黃曲霉毒素的經(jīng)典方法，其原理是將樣品經(jīng)過提取、柱層析、洗脫、濃縮、薄層分離后，在波長365nm紫外光下產(chǎn)生藍(lán)紫色或黃綠色熒光，并根據(jù)其在薄層上顯示的最低檢出量來確定其含量。聶孝同等【7】應(yīng)用薄層層析法采用以下步驟對飼料中的黃曲霉毒素進(jìn)行了檢測。首先是黃曲霉毒素的提?。喊逊鬯檫^20目篩的樣品放人具塞三角瓶中，加入甲醇(55：45)溶液，再加入石油醚蓋嚴(yán)，靜置片刻后，用慢速定量濾紙過濾于分液漏斗中，通人三氯甲烷，再過濾并將濾液在65℃水浴上通風(fēng)揮干，冷卻后加入苯一乙腈(98：2)充分
5、混合，然后吸取上清液待用。對雜質(zhì)少的樣品，采取直板定性。依次點板、展開、觀察；其中預(yù)展展開劑為無水乙醚，正展展開劑為丙酮一三氯甲烷(1：9)，且展開劑要事先加入到展開槽內(nèi)；通過觀察，無熒光出現(xiàn)為陰性．出現(xiàn)熒光則為陽性，需作直板確證，若繼續(xù)有熒光出現(xiàn)，則進(jìn)一步作定量確證；樣品的某一點熒光強(qiáng)度與標(biāo)樣點的熒光強(qiáng)度相一致，則取此點為樣本的黃曲霉毒素含量值，否則作稀釋定量檢測；但是對于雜質(zhì)多的樣品，須采取橫板定性；同樣經(jīng)過點板、展開、觀察，有熒光者為陽性檢出，進(jìn)一步作橫向確證，經(jīng)再次檢測觀察呈陽性，則需要定量確證黃曲霉毒素含量。為了提高薄層層析法的精度，建立薄層掃描法來測定黃曲
6、霉毒素，它是薄層層析法的儀器化，樣品的處理和層析條件與薄層層析法相同，只是在標(biāo)準(zhǔn)品的設(shè)定和結(jié)果判定上有所不同。楊焱等【8】把粉碎過篩的樣品加水濕潤后通人氯仿過濾，取濾液在65℃水浴上揮干，再用苯一乙脯溶液轉(zhuǎn)移；通過點板，用乙醚預(yù)展后，再用氯仿一丙酮(92：8)展開，在365nm紫外光下觀察，根據(jù)AFB1、AFB2、AFG1和AFG2分別顯示的藍(lán)紫色、藍(lán)紫色、綠色和綠色熒光，在掃描儀上繪制AFT掃描圖譜，并由此分辨出黃曲霉毒素種類；最后作定量分析：以斑點面積積分值為縱坐標(biāo)，標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，建立回歸方程，得到樣品的黃曲霉毒素濃度。2．2高效液相色譜法(H
7、PLC)用高效液相色譜法測定黃曲霉毒素，一般分提取、凈化、衍生和測定幾個步驟。提取通常是黃曲霉毒素分析的第一步，所用的儀器和溶劑有很多種[2,9]韓紅巖等[10]對于受黃曲霉毒素污染不同程度的玉米用60％甲醇、80％丙酮、90％乙腈提取，均得到較高的回收率，其中，80％丙酮的毒性與乙腈、甲醇相比較小，操作較為安全，是提取黃曲霉毒素的最佳選擇；王光建等[11]給樣品中加入甲醇(6：4)溶液，高速搗碎，將提取物于離心管離心5～10min后，給上清液中加入氫氧化鐵懸浮液攪勻，再加人Tris一鹽酸緩沖液，離心后待用；李佐卿等[12]首先加人氯化鈉，再加人甲醇
