比格犬注射重組腺病毒adhgf后血清中抗腺病毒抗體及中和抗體的檢測論文

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1、比格犬注射重組腺病毒AdHGF后血清中抗腺病毒抗體及中和抗體的檢測論文哈小琴,趙治華,呂同德,勞妙芬,吳丹莉,吳祖澤【摘要】目的：觀察Beagle犬重復(fù)給予AdHGF后血清中抗腺病毒抗體及抗肝細(xì)胞生長因子（hepatocytegroo齡.freelAb（RD），辣根過氧化物酶標(biāo)記羊抗鼠IgG(JacksonImmunoResearchLaboratories,Inc),重組人HGF蛋白純品（RD）,DMEM(Gibco),小牛血清（天津血研所）,猴抗血清（軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院五所昭衍新藥研究中心），潔凈工作臺(tái)（北京半導(dǎo)體設(shè)備一廠），

2、CO2培養(yǎng)箱（Sanyo）,IX70倒置熒光顯微鏡（Olympus）,.freelpus）.1.2方法1.2.1動(dòng)物分組設(shè)正常對(duì)照組、手術(shù)對(duì)照組、AdHGF小劑量組(2.4×107pfu/kg,擬臨床用量3.4倍)和大劑量組(2.4×108pfu/kg,擬臨床用量34倍)，每組6只.1.2.2給藥途徑采用心肌注射和臀部肌肉注射相結(jié)合,首次心肌注射，其余13次為肌肉注射給藥.給藥期限為7o.1.2.3犬血清中抗腺病毒抗體測定利用病毒中和反應(yīng)方法，即病毒與抗血清中和后，將其感染細(xì)胞，細(xì)胞不產(chǎn)生病變?yōu)榭瓜俨《究贵w陽性，反之細(xì)胞出現(xiàn)病變

3、為抗腺病毒抗體陰性，并觀察綠色熒光是否出現(xiàn).將293細(xì)胞接種于96孔細(xì)胞培養(yǎng)板上，5×104個(gè)/孔.次日感染病毒（AdGFP）與血清的混合液:取20μL犬血清加8u的青霉素，再加5×106pfu病毒,相當(dāng)于100MOI(multiplicityofinfection,感染強(qiáng)度)，混勻后37℃水浴30min.吸棄原培養(yǎng)液，加入上述混合液，每個(gè)樣品雙份，每孔加入200μL，以小牛血清加病毒液作陰性對(duì)照,猴抗血清為陽性對(duì)照，置37℃，50mL/LCO2的培養(yǎng)箱繼續(xù)孵育.24，36，48h觀察熒光及CPE(細(xì)胞病變效應(yīng)).1.2.4犬血

4、清中中和抗體測定用ELISA方法測定血清中抗HGF抗體水平.收集穩(wěn)定分泌表達(dá)HGF的CHO細(xì)胞的培養(yǎng)上清作為抗原，辣根過氧化物酶標(biāo)記的羊抗鼠IgG為二抗，新鮮配制的OPD為底物顯色液，測A490nm值.同時(shí)用抗HGFmAb作一標(biāo)準(zhǔn)曲線，以計(jì)算抗體的滴度.2結(jié)果2.1血清抗腺病毒抗體檢測共12次采血，受試動(dòng)物212只次，手術(shù)對(duì)照組及正常對(duì)照動(dòng)物血清均出現(xiàn)明顯CPE及強(qiáng)熒光(圖1).給藥前及給藥2次后24h的血清也出現(xiàn)明顯的陽性結(jié)果.給藥4次后大劑量組5只動(dòng)物血清均對(duì)腺病毒有中和作用(圖2A)，小劑量組3只動(dòng)物也已檢測到抗體.給藥6次

5、后，動(dòng)物全部檢測到高滴度抗體(圖2B).停藥后4etovDM,GaggarA,NiS,etal.Adenovirusbindingtobloodfactorsresultsinlivercellinfectionandhepatotoxicity［J］.JVirol,2005,79(12):7478-7491.［4］PandoriM,HobsonD,SanoT.Adenovirusmicrobeadconjugatespossessenhancedinfectivity:aneE.Rebinantadenovirusvector

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