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1、半葉馬尾藻多糖對(duì)HL論文唐慎華賈秀紅朱淑霞李建廠(chǎng)陸羨【關(guān)鍵詞】半葉馬尾藻多糖；HL【摘要】目的探討半葉馬尾藻多糖對(duì)HL60細(xì)胞CD11b、CD11a表達(dá)的影響。方法MTT研究半葉馬尾藻多糖對(duì)HL60細(xì)胞體外增殖的影響，采用流式細(xì)胞術(shù)研究對(duì)CD11b、CD11a表達(dá)的影響。結(jié)果半葉馬尾藻多糖能增高CD11b、CD11a的表達(dá)率，且作用隨時(shí)間和濃度的增加而增強(qiáng)。結(jié)論半葉馬尾藻多糖在體外可影響HL60細(xì)胞CD11b、CD11a的表達(dá)，提示其在抗腫瘤方面有一定的開(kāi)發(fā)應(yīng)用前景?！娟P(guān)鍵詞】半葉馬尾藻多糖；HL60細(xì)胞；CD11
2、b；CD11a【Abstract】ObjectiveToexploretheeffectofseaSargassumconfusumontheexpressionofCD11bandCD11ainHL60cell.MethodTheMTTandFCMapproachesedependentmanner.ConslusionTheseaiadrug.【KeySargassumconfusum,SP）研究其對(duì)HL60細(xì)胞CD11b、CD11a表達(dá)的影響。1材料與方法1.1藥物與試劑SP（廣東醫(yī)學(xué)院劉秋英碩士惠贈(zèng)），RP
3、MI1640培養(yǎng)基（GibcoCo,USA），F(xiàn)ITC標(biāo)記的鼠抗人CD11a單克隆抗體（ExalphaBiologicalsInc,USA），F(xiàn)ITC標(biāo)記的鼠抗人CD11b單克隆抗體（ExalphaBiologicalsInc,USA），F(xiàn)ITC標(biāo)記的非特異鼠抗人IgG2a（ExalphaBiologicalsInc,USA）。1.2主要儀器OLYMPUSIMTI型倒置相差顯微鏡（Japan），EPICSXL流式細(xì)胞儀（CoulterCo,USA），丹尼酶標(biāo)儀（MK3）(Denmark)，SI1640液體培養(yǎng)體系，
4、置37℃、5%CO2恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，隔天換液一次。實(shí)驗(yàn)選用對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞。1.3.2MTT抑制實(shí)驗(yàn)：參照文獻(xiàn)［1，2］，將細(xì)胞以2×105/ml密度接種于96孔培養(yǎng)板中，加入不同濃度的SP，置37℃、5%CO2孵箱中分別培養(yǎng)24、48、72h后，每孔加入MTT（5mg/ml）20μl,繼續(xù)培養(yǎng)4h，加入MTT裂解液（20%SDS+50%DMF+30%H2O）100μl，37℃、5%CO2孵箱中孵育8h，酶標(biāo)儀檢測(cè)各組細(xì)胞的A630/A570值，計(jì)算抑制率(IR)。抑制率（IR）＝（1－用藥組A值/對(duì)照組A值）×1
5、00%。1.3.3FCM檢測(cè)CD11b、CD11a的表達(dá)：取藥物處理后的細(xì)胞懸液1000r/min離心5min，PBS洗滌2次，并用PBS重懸細(xì)胞，調(diào)整細(xì)胞數(shù)為1×106/ml，取100μl細(xì)胞懸液，加入10μlCD11b單克隆抗體和10μlCD11a單克隆抗體；另取100μl細(xì)胞懸液，加入10μlIgG2a作陰性對(duì)照，4℃避光孵育30min，PBS洗滌2次，200目尼龍網(wǎng)過(guò)濾，上機(jī)檢測(cè)。1.3.4統(tǒng)計(jì)處理：實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用x±s表示，使用SPSS11.5統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)描述，采用單因素方差分析（OneTT結(jié)果以不同濃度
6、（0、50、100、200、400、800μg/ml）的SP作用于HL60細(xì)胞24、48、72h，用MTT法檢測(cè)其對(duì)HL60細(xì)胞增殖的影響，如表1，圖1、2所示，隨著SP濃度的增加和作用時(shí)間的延長(zhǎng)，抑制率逐漸增加。當(dāng)濃度為800μg/ml，作用48h時(shí)抑制率為（5130±310）%，與對(duì)照組相比差異有顯著性（P001）。其24、48、72h的IC50為（77678±2830）μg/ml、（50897±2208）μg/ml、（35567±1023）μg/ml。表1SP對(duì)HL60細(xì)胞增殖的抑制作用（略）注：與0μg/m
7、l組相比◇P005，◆P001；*F=156214，**F=47032,***F=109831圖1抑制作用的劑效曲線(xiàn)（略）圖2抑制作用的時(shí)效曲線(xiàn)(略)2.2CD11b、CD11a的表達(dá)結(jié)果如表2、3所示，隨著藥物濃度及作用時(shí)間的增加，CD11a、CD11b表達(dá)逐漸上升。表2SP對(duì)HL60細(xì)胞CD11a表達(dá)的影響（略）注：與0μg/ml組相比△P005，◆P001；與300μg/ml組相比▲P001，與500μg/ml組相比★P001表3SP對(duì)HL60細(xì)胞CD11b表達(dá)的影響（略）注：與0μg/ml組相比◇P005，
8、◆P001；*F=21533，**F=26044，***F=366073討論白血病是人群發(fā)病率較高的惡性腫瘤之一，化療是重要的治療手段，但其副作用是幾乎不可克服的缺點(diǎn)。在祖國(guó)醫(yī)學(xué)中，中草藥在抗腫瘤中的應(yīng)用源遠(yuǎn)流長(zhǎng)，如馬尾藻等治療乳腺癌和子宮癌。現(xiàn)代研究證明近100種中藥多糖具有不同程度的抗腫瘤作用。我們的研究結(jié)果表明，SP對(duì)HL60細(xì)胞增殖呈明顯抑制作用，且
