益智方對(duì)阿爾茨海默病大鼠學(xué)習(xí)記憶的影響

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1、益智方對(duì)阿爾茨海默病大鼠學(xué)習(xí)記憶的影響作者:高麗萍,伊朝暉,柴錫慶,程書玲,李貞【摘要】  目的探討益智方對(duì)阿爾茨海默?。ˋD)大鼠學(xué)習(xí)記憶能力的影響。方法在基礎(chǔ)飼料中添加三氯化鋁,Al3+劑量為111.9mg/kg體重,連續(xù)染毒3個(gè)月復(fù)制大鼠AD模型。采用Y-電迷宮儀檢測(cè)正常對(duì)照組、模型組、低劑量中藥組、中劑量中藥組、高劑量中藥組大鼠學(xué)習(xí)記憶能力,觀察腦區(qū)病理形態(tài)學(xué)改變。結(jié)果益智方能明顯增加大鼠逃避正確率、縮短逃避潛伏期,明顯減輕大鼠腦神經(jīng)元損傷。結(jié)論益智方是防治AD模型大鼠學(xué)習(xí)記憶能力減退的有效藥物?!娟P(guān)鍵詞】鋁阿爾茨海默病大鼠學(xué)習(xí)記憶益智方老年性癡呆是一種多病因參與

2、的神經(jīng)退行性疾病,伴隨著老年人口的增加,老年性癡呆的發(fā)病率也在增加,其中以阿爾茨海默病(AlzhEimerAD)較為多見。本病病因復(fù)雜,目前尚缺乏有效的防治藥物與手段。根據(jù)中醫(yī)腎藏精、通腦、主智理論,本研究采用氯化鋁制作大鼠AD模型,探討了自擬益智方對(duì)大鼠學(xué)習(xí)記憶能力的影響?! ?材料與儀器AlCl3·6H2O,分析純,天津雙船化學(xué)試劑廠產(chǎn)品;水合氯醛分析純,天津市華東試劑廠產(chǎn)品;多聚甲醛,化學(xué)純,中國醫(yī)藥集團(tuán)上海試劑化學(xué)公司產(chǎn)品。中藥復(fù)方組份:淫羊藿、熟地、黃芪等組成,由河北省石家莊醫(yī)藥公司提供,生藥經(jīng)河北醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院生藥教研室鑒定均為純品。按傳統(tǒng)方法將中藥浸浴1h,

3、文火煎兩次,去渣,合并、濃縮,每毫升生藥含量為2.7g,4℃冰箱保存,用前巴氏消毒。MG-2型Y-電迷宮儀,張家港市生物醫(yī)學(xué)儀器廠生產(chǎn);OA切片機(jī)Lukar-2135;全自動(dòng)纖維攝像系統(tǒng)Neg/kg體重,飼喂添加AlCl3·6H2O飼料當(dāng)天起,3個(gè)中藥組用中藥煎劑灌胃,用量為:低劑量中藥組10.8g·kg-1·d-1、中劑量中藥組21.6g·kg-1·d-1,高劑量中藥組30.4g/kg/天,模型組、對(duì)照組大鼠每日灌服等量溫開水。動(dòng)物自由飲水,動(dòng)物房溫度(20±2)℃,第90天,采用Y-電迷宮儀訓(xùn)練和測(cè)定大鼠學(xué)習(xí)記憶能力?! ?.2學(xué)習(xí)記憶能力測(cè)試參照郭宗君方法[1],在

4、夜晚安靜和避光的條件下,用Y型電迷宮儀訓(xùn)練和測(cè)試大鼠的學(xué)習(xí)記憶能力。大鼠首先在Y型電迷宮儀的安全臂燈源處停留適應(yīng)1min,然后給予電刺激(電壓90V,持續(xù)1s),當(dāng)大鼠逃避到新的安全臂燈源處時(shí),讓大鼠在該處休息適應(yīng)1min,順時(shí)針依次將通電臂換為安全臂,連續(xù)訓(xùn)練和測(cè)定4d,每天10次/只,記錄每只大鼠逃避正確率,受電刺激后,大鼠從通電臂燈源處直接逃至安全臂燈源處為正確逃避,所用時(shí)間為逃避潛伏期,如果電刺激后,大鼠不出現(xiàn)逃避或逃避到安全臂的非燈源處停留,且對(duì)敲擊聲沒有做出正確反應(yīng)的為逃避錯(cuò)誤,其潛伏期記為10s,逃避正確率越高,逃避潛伏期越短,說明學(xué)習(xí)記憶能力越好?! ?.

5、3腦區(qū)病理形態(tài)學(xué)檢查行為實(shí)驗(yàn)測(cè)試結(jié)束后,從每組隨機(jī)抓取4只大鼠,采用4%水合氯醛按1ml/100g體重腹腔注射,麻醉后固定大鼠,從大鼠胸骨劍突處開胸,經(jīng)左心室插管至主動(dòng)脈,快速灌注0.01mol/L的冷生理鹽水100ml沖洗血液,之后用4%多聚甲醛500ml灌注,取腦組織后立刻固定于4%多聚甲醛中,常規(guī)石蠟切片,HE染色,觀察腦組織形態(tài)改變。  2.4數(shù)據(jù)處理實(shí)驗(yàn)結(jié)果采用SPSS10.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。  3結(jié)果  3.1大鼠一般狀況模型組大鼠精神萎靡,常聚堆靜臥,被毛蓬松,反應(yīng)遲鈍。各中藥組大鼠上述癥狀明顯減輕,且隨劑量增加效果愈加明顯?! ?.2益智方對(duì)大

6、鼠Y-迷宮逃避正確率的影響由表1可見,在連續(xù)前3天的測(cè)試中,模型組、各中藥組大鼠逃避正確率與對(duì)照組無顯著性差異(P>0.05),至第4天,模型組大鼠的逃避正確率沒有再升高,而明顯低于正常對(duì)照組(P<0.05﹚,中劑量與高劑量中藥組大鼠逃避正確率明顯高于模型組(P<0.05或P<0.01),各中藥組之間大鼠逃避正確率無顯著性差異(P>0.05)。表1各組大鼠Y-迷宮逃避正確率比較(略)與正常對(duì)照組比較,*P<0.05;與模型組比較,#P<0.05##P<0.01  3.3益智方對(duì)大鼠逃避潛伏期影響連續(xù)訓(xùn)練3d后,第4天測(cè)定各組大鼠逃避潛伏期。由圖1可見,與

7、正常對(duì)照組比較,模型組大鼠逃避潛伏期明顯延長(P<0.05﹚;與模型組比較,中劑量組與高劑量組大鼠逃避潛伏期明顯縮短(P<0.05或P<0.01),各模型組大鼠之間逃避潛伏期無顯著性差異。  3.4大鼠腦組織學(xué)形態(tài)學(xué)觀察在光鏡下觀察,對(duì)照組大鼠皮層、海馬細(xì)胞排列規(guī)則。模型組大鼠皮層錐體神經(jīng)元數(shù)目明顯減少,排列紊亂,層數(shù)減少,胞核染色體加深;海馬CA1區(qū)神經(jīng)細(xì)胞排列紊亂,層數(shù)減少,神經(jīng)元數(shù)目減少,錐體細(xì)胞顆??张葑冃?,膠質(zhì)細(xì)胞增多,深染,并可見許多固縮細(xì)胞,CA3區(qū)發(fā)現(xiàn)許多細(xì)胞內(nèi)有神經(jīng)纖維纏結(jié)(NFT)樣改變。低劑量中藥組大鼠腦

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