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《羥基喜樹堿對a549人肺腺癌細(xì)胞增殖的影響論文》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在工程資料-天天文庫。
1、羥基喜樹堿對A549人肺腺癌細(xì)胞增殖的影響論文.freelL時,抑制作用明顯增強(qiáng),抑制率達(dá)44.17%,藥物濃度達(dá)到100μg/mL時抑制率達(dá)50.28%；隨著藥物作用時間的延長,抑制更明顯,.freelL藥物組作用48h抑制率達(dá)70.98%。結(jié)論羥基喜樹堿具有抑制A549人肺腺癌細(xì)胞增殖的作用,抑制作用具有明顯的濃度和時間依賴性?！娟P(guān)鍵詞】羥基喜樹堿；A549人肺腺癌細(xì)胞；細(xì)胞培養(yǎng)；MT華強(qiáng))Abstract：ObjectiveToobservetheeffectofHydroxycamptothecin(HCPT)onproliferationofhuma
2、nlungcancercelllineA549invitro.MethodUsingcellcaltureandMTTassaytoobservetheeffectofHCPTonproliferationofhumanlungcancercelllineA549.ResultLoanlungcancercelllineA549after24h.TheeffectL,andtheinhibitoryrateL.TheinhibitoryeffectofHCPTbecamemoresignificantulationofthetime,andtheinhibit
3、oryrateof100μg/mLconcentrationofHCPTanlungcancercellA549invitro.Theeffectisdoseandtimedependent.Keyptothecin；humanlungcancercelllineA549；cellcalture；MTTassay羥基喜樹堿(hydroxycamptothecin,HCPT)是天然生物堿,來源于我國特有且資源豐富的珙桐植物——喜樹。TT分析法觀察HCPT對A549人肺腺癌細(xì)胞增殖的抑制作用,從體外實驗驗證臨床效果,為今后進(jìn)一步探討HCPT的其它抗癌機(jī)制奠定基礎(chǔ)。
4、1實驗材料1.1藥物和試劑羥基喜樹堿注射液(湖北黃石飛云制藥有限公司,批號041201)。小牛血清(杭州四季青生物工程材料有限公司)；RPMI-1640干粉(美國Gibco公司)；MTT及胰酶(華美生物工程公司)；二甲基亞砜(DMSO,美國Sigma公司)。1.2細(xì)胞株A549人肺腺癌細(xì)胞株,中國醫(yī)科大學(xué)細(xì)胞生物教研室提供。1.3主要儀器CO2恒溫細(xì)胞培養(yǎng)箱(德國),超凈工作臺(日本Sanyo公司產(chǎn)品),倒置相差顯微鏡(日本),酶標(biāo)儀(臺灣)。2實驗方法2.1藥液制備及分組將一定量的羥基喜樹堿注射液用適量的RPMI-1640完全培養(yǎng)液分別配成幾種不同的濃度備用
5、,終濃度分別為1、50、100μg/mL。實驗設(shè)不同濃度用藥組、空白對照組。2.2細(xì)胞培養(yǎng)將凍存于液氮中的安瓿取出,迅速放入37～40℃水浴中,使其在1min內(nèi)融化,無菌條件下打開安瓿,將細(xì)胞懸液吸取到培養(yǎng)瓶中,補(bǔ)足培養(yǎng)液后,置CO2培養(yǎng)箱(5%CO2,37℃)中培養(yǎng)。待細(xì)胞貼壁(約6h后),換培養(yǎng)液1次,至細(xì)胞長成單層后即可傳代,用于實驗。2.3細(xì)胞增殖的測定采用MTT比色法來檢測細(xì)胞存活情況。待細(xì)胞形成單層,用0.25%胰蛋白酶消化,10%小牛血清RPMI-1640培養(yǎng)液懸浮細(xì)胞,將細(xì)胞濃度調(diào)整為1×105mL,接種至96孔培養(yǎng)板中,每孔0.2mL細(xì)胞懸液
6、,繼續(xù)培養(yǎng)24h后,棄培養(yǎng)液加無血清培養(yǎng)液,48h同步化后,分別加入不同濃度的新鮮含藥培養(yǎng)液(1、50、100μg/mL)和無藥培養(yǎng)液,每個濃度設(shè)8個復(fù)孔,培養(yǎng)24h,每孔加入20μLMTT(5mg/mL)液,繼續(xù)培養(yǎng)4h,棄上清,每孔加入100μLDMSO終止反應(yīng),震蕩10min使液體混勻,應(yīng)用酶標(biāo)儀檢測540nm波長處的OD值。2.4藥物對細(xì)胞增殖抑制時間依賴性的測定細(xì)胞經(jīng)過前述同步化處理后,分別加入不同濃度(1、50、100μg/mL)的含藥培養(yǎng)液,培養(yǎng)至8、12、24、48h后,用MTT法檢測,方法同“2.3”項。2.5統(tǒng)計學(xué)方法實驗數(shù)值以x±s表示,
7、并采用兩樣本均數(shù)比較的t檢驗進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)處理。3結(jié)果3.1培養(yǎng)A549人肺腺癌細(xì)胞株的觀察首次換液,倒置相差顯微鏡下可見較多的細(xì)胞碎片,換液后視野變得較為清晰。細(xì)胞以突起相連接,核較大,胞質(zhì)較少,核漿比例失調(diào),細(xì)胞質(zhì)透明。3.2不同濃度藥物對細(xì)胞增殖的抑制以各濃度(1、50、100μg/mL)含藥培養(yǎng)液溫育A549人肺腺癌細(xì)胞株,作用24h后,1μg/mL藥物組對細(xì)胞株未見明顯抑制作用,其余各組均表現(xiàn)出明顯抑制作用,100μg/mL藥物組最佳,抑制率達(dá)50.28%。見表1。表1不同濃度HCPT作用24h對A549人肺腺癌細(xì)胞株增殖的抑制作用(略)注：與空白對照組
8、比較,*P0.01。3.3藥物對細(xì)胞抑
