甘草活性成分抗呼吸道合胞病毒作用論文

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1、甘草活性成分抗呼吸道合胞病毒作用論文張建軍李洪源王吉錫李鑫樸英愛陳振華謝志平楊慶偉【摘要】目的研究甘草抗病毒活性成分(GX)體外抗呼吸道合胞病毒(RSV)的作用。方法采用中性紅實驗和觀察細(xì)胞病變(CPE)法，以利巴韋林為陽性藥,測定GX對RSV的抑制作用。結(jié)果GX的半數(shù)中毒濃度（TC50）為460.00?μg/ml，半數(shù)有效抑制濃度(EC50)為23.53?μg/ml，治療指數(shù)(TI)為19.55;GX在RSV感染Hela細(xì)胞2，4，6，8，10?h后給藥,對RSV復(fù)制均有明顯的抑制作用(P0.

2、01)；且GX對RSV有中和作用。結(jié)論GX在體外對RSV復(fù)制有明顯的抑制作用?！娟P(guān)鍵詞】甘草；呼吸道合胞病毒；抗病毒作用呼吸道合胞病毒（RSV）是一個世界范圍內(nèi)嬰幼兒最常見的呼吸道感染的病原體。目前.freell。本次實驗采用100TCID50/0.2?ml的感染量。硅膠制備板(安徽良臣硅源材料廠)。甲醇、三氯甲烷、無水乙醇等，均為分析純(天津市博迪化工有限公司)。中性紅(上海華舜生物工程有限公司)，用磷酸鹽緩沖液稀釋。脫色液：由無水乙醇、枸櫞酸鈉和鹽酸組成。12方法121甘草抗病毒活性成

3、分（GX）的制備甘草經(jīng)水煎煮浸提、醇沉、大孔吸附樹脂柱層析得到的GC314,再經(jīng)由氯仿和甲醇組成的展開劑，在硅膠板上經(jīng)薄層層析得GX。122藥物毒性實驗用細(xì)胞維持液將GX和利巴韋林釋為7個濃度組，分別加入到Hela細(xì)胞已長成單層的96孔培養(yǎng)板上。同時設(shè)正常細(xì)胞對照組。置35℃、5%CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)3?d后，棄去維持液,每孔添加0.2?ml中性紅染液,放回培養(yǎng)箱培養(yǎng)2?h。取出后用磷酸鹽緩沖液(PBS)洗2次,添加0.2?ml脫色液。室溫暗處放置30?min后,酶標(biāo)儀450?nm波長下測吸

4、光度(A)值〔4〕，測定細(xì)胞存活率，求藥物半數(shù)中毒濃度(TC50)。細(xì)胞存活率=藥物組平均A值/細(xì)胞對照組平均A值×100%。123藥物抗RSV實驗參照文獻〔5〕。實驗分3組進行。(1)藥物的抑制作用：在96孔板上，接種100TCID50/0.2?mlRSV液，0.2?ml/孔。吸附2?h后，分別加入不同濃度的GX和利巴韋林。置培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。同時設(shè)正常細(xì)胞對照組和病毒對照組，待病毒對照組細(xì)胞病變(CPE)為4時，中性紅實驗同上,測定病毒抑制率，求藥物的半數(shù)有效濃度(EC50)和治療指數(shù)(TI

5、)。病毒抑制率=［實驗組(藥物+病毒)平均A值-病毒對照組平均A值］/［正常細(xì)胞對照組平均A值-病毒對照組平均A值］×100%。CPE記錄規(guī)則：0為細(xì)胞無CPE；1為0～25%CPE；2為25%～50%CPE；3為50%～75%CPE；4為75%～100%CPE。TI=TC50/EC50。(2)不同時間給藥對RSV抑制作用：向96孔板中，加入100TCID50/0.2?mlRSV液，0.2?ml/孔，分別作用2，4，6，8，10，12?h后吸棄病毒液，再分別加入GX（濃度為120.00?μg/m

6、l）和利巴韋林（濃度為80.00?μg/ml），培養(yǎng)方法同上。待病毒對照組CPE為4時，記錄CPE結(jié)果。(3)藥物的中和作用：200TCID50/0.2?mlRSV液與含不同濃度藥物的維持液等體積混合，35℃作用2?h后,加到96孔板中，0.2?ml/孔。吸附2?h，棄上清，加細(xì)胞維持液，置培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。待病毒對照組CPE為4時，記錄CPE結(jié)果。13統(tǒng)計分析采用SAS?82軟件進行分析。利用ReedMuench法測定病毒TCID50，Logit回歸計算藥物TC50和EC50〔6〕。不同時間

7、處理組或不同劑量組與病毒對照組之間的結(jié)果比較采用Kruskal-edSaoPaulo,2001,56(3):79-90.〔2〕朱丹,劉華剛.抗病毒中藥的最新研究進展［J］.中國醫(yī)學(xué)文摘：內(nèi)科學(xué)，2005，26(6)：747-748.〔3〕劉鑫妍，李洪源，王秀琴，等.甘草抗病毒有效部位(GC3-1-4)體外抑制呼吸道合胞病毒的研究［J］.中醫(yī)藥信息，2006，23（4）：65-67.〔4〕MarkRP,DaleLB,PaulFT.Potentinhibitionofrespiratorysyncy

8、tialvirusreplicationusinga2-5A-antisensechimeratargetedtosignalsicRNA［J］.ProcNatlAcadSciUSA，1998,95(15):8874-8879.〔5〕何靜，楊占秋，石麗橋，等.鹽酸阿比朵爾抗呼吸道合胞病毒機制初探［J］.武漢大學(xué)學(xué)報：醫(yī)學(xué)版,2006,27(1)：69-71.〔6〕劉昌孝，孫瑞元.藥物評價實驗設(shè)計與統(tǒng)計學(xué)基礎(chǔ)［M］.北京:軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)出版社，1999：31-32.〔7〕JeffreyIC.Lick