紫花茄皂苷的體外抗腫瘤及溶血性實(shí)驗(yàn)研究論文

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1、紫花茄皂苷的體外抗腫瘤及溶血性實(shí)驗(yàn)研究論文【摘要】目的探討紫花茄皂苷I1對(duì)人肝癌BEL7402細(xì)胞的抗腫瘤作用并對(duì)其進(jìn)行溶血性檢查。方法用酸性磷酸酶（APA）法測(cè)定不同濃度紫花茄皂苷處理人肝癌BEL7402細(xì)胞后的OD405值。體外溶血性實(shí)驗(yàn)檢測(cè)皂苷安全性。結(jié)果紫花茄皂苷對(duì)BEL7402細(xì)胞有明顯的抗腫瘤作用，在皂苷作用72h后，實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組的OD405值比較差異有顯著性（P＜0.05）。體外溶血實(shí)驗(yàn)，100μg·ml-1的皂苷Ⅰ1不引起兔紅細(xì)胞的溶血和凝集。結(jié)論紫花茄皂苷I1對(duì)人肝癌細(xì)胞的抗腫瘤

2、作用呈明顯的濃度依賴性,在體外安全性較好。【關(guān)鍵詞】皂苷抗腫瘤溶血【Abstract】ObjectiveToinvestigatetheantineoplasticactivityandbloodcellhaemolysistestonsaponin.MethodsTheOD405valueofcellentbytheacidphosphataseassay(APA).Thesafetyofsaponininedbyhaemolysisandbloodcellagglutinationtests.Results

3、ThesaponinsignificantlyinhibitedproliferationofBEL7402cells.ApparentdifferenceinOD405valuel-1saponincausednohaemolysisandbloodcellagglutinationinvitro.ConclusionThesaponinI1hasconcentrationdependentantineoplasticactivityonhumanhepatocarcinomacells.Thesafe

4、tyofsaponinolysis皂苷是廣泛存在于高等植物和某些低等動(dòng)物中的一類具有廣泛藥理活性的三萜及甾體的糖綴合物，很多中草藥的主要活性成分都是皂苷類化合物。近年來隨著分離提取技術(shù)的不斷發(fā)展，多種薯蕷皂苷被分離出來，并不斷發(fā)現(xiàn)其新的生物活性，特別是在抗腫瘤、免疫調(diào)節(jié)、干預(yù)細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、抗炎、降血脂、抗艾滋病等方面的作用引起了人們的重視［１.freelpus）。1.2實(shí)驗(yàn)動(dòng)物新西蘭大白兔，雄性，體重2.5kg，由濱州醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。1.3藥物及配制紫花茄皂苷I1由中國科學(xué)院生態(tài)研究環(huán)境中心生物技術(shù)室

5、提供。以二甲基亞砜（DMSO）溶解后用生理鹽水稀釋至100μg/ml，其中DMSO濃度為0.1％。1.42%紅細(xì)胞懸液的制備取10ml新鮮新西蘭兔血，滴入含2500IU肝素鈉的離心管中，加入10ml生理鹽水，搖勻后2500r/min離心5min，傾去上清液，再加生理鹽水混合離心，反復(fù)洗4次，最后一遍用巴比妥鈉緩沖液洗至上清液呈無色透明，然后將所得紅細(xì)胞用巴比妥鈉緩沖液稀釋成紅細(xì)胞壓積百分比為2%的紅血細(xì)胞混懸液。1.5酸性磷酸酶法（acidphosphataseassay,APA）［7］檢測(cè)細(xì)胞存活率取對(duì)數(shù)生長

6、期細(xì)胞，消化后制成細(xì)胞懸液，按1×103/孔的密度接種于96孔板。培養(yǎng)24h后，實(shí)驗(yàn)組加入先用二甲基亞砜（DMSO）溶解、再經(jīng)RPMI1640培養(yǎng)液稀釋至終濃度為1～10μg·ml-1的皂苷；空白對(duì)照組加入RPMI1640培養(yǎng)液；溶劑對(duì)照組加入經(jīng)同樣稀釋的溶劑，含0.01%～0.1%DMSO。實(shí)驗(yàn)中每個(gè)濃度設(shè)8個(gè)平行孔，作用72h后用APA法經(jīng)EL311酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀在405nm波長處測(cè)定吸光度OD值，空白孔調(diào)零，實(shí)驗(yàn)重復(fù)三次，取平均值。1.6溶血性實(shí)驗(yàn)［8，9］在2%的兔紅血細(xì)胞混懸液中，分別加入不同體積

7、的100μg·ml-1的皂苷Ⅰ1，輕輕搖勻置37℃水浴中保溫1h后，2000r/min離心5min，每管取上清100μl，經(jīng)EL311酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀于波長405nm測(cè)量吸光度。第6組不加皂苷,作為空白陰性對(duì)照；第7組不加皂苷并用蒸餾水代替巴比妥鈉緩沖液，作為充分溶血陽性對(duì)照（表1）?？瞻捉M調(diào)零，每組設(shè)3個(gè)平行孔，計(jì)算吸光度平均值。實(shí)驗(yàn)重復(fù)三次，取平均值。根據(jù)吸光度平均值按下式計(jì)算相對(duì)溶血率：相對(duì)溶血率＝OD實(shí)驗(yàn)組/OD陽性對(duì)照×100％。表1各實(shí)驗(yàn)組配比量表1.7統(tǒng)計(jì)學(xué)方法所得數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，采用SP

8、SS10.0統(tǒng)計(jì)分析軟件包分析統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。2結(jié)果2.1紫花茄皂苷的體外抗腫瘤作用不同濃度的紫花茄皂苷I1作用于BEL7402細(xì)胞72h后,APA法測(cè)定結(jié)果如表2,實(shí)驗(yàn)表明，加藥組從2.0μg·ml-1起，與對(duì)照組的OD405比較，即有顯著性差異(P＜0.05),而且隨著皂苷濃度的增加抗腫瘤作用也增加,呈劑量依賴性。表2紫花茄皂苷I1對(duì)BEL7402細(xì)胞抗腫瘤作用注：與空白對(duì)照比