茅莓總皂苷體外抗腫瘤作用研究

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1、從本學(xué)科出發(fā)，應(yīng)著重選對國民經(jīng)濟具有一定實用價值和理論意義的課題。課題具有先進性，便于研究生提出新見解，特別是博士生必須有創(chuàng)新性的成果茅莓總皂苷體外抗腫瘤作用研究作者：鄭振張玲菊黃常新黃巧玲尉曉冬葉建根茅莓，別名天青地白草、紅梅消、三月泡，為薔薇科懸鉤子植物，具有活血化瘀，清熱解毒等作用。本研究選擇了HR8348直腸腺癌細胞、A375黑色素瘤細胞、Hut-78人皮膚T細胞淋巴瘤細胞和A431人表皮癌細胞為癌細胞株，用茅莓總皂苷對它們進行體外抗腫瘤試驗,同時檢測了茅莓總皂苷對HR8348直腸腺癌周期的影響，結(jié)果顯示對前三種腫瘤有良好的抗腫瘤活性，通過將細胞周期阻滯在S期在而發(fā)揮抗腫瘤作用?！　?/p>

2、1材料與方法茅莓總皂苷茅莓總皂苷由浙江省中醫(yī)藥研究院提取。實驗所用高中低三種濃度分別為1mg%、%和%。細胞株HR8348直腸腺癌細胞、A375黑色素細胞瘤細胞、Hut-78人皮膚T細胞淋巴瘤細胞和A431人表皮癌細胞。主要藥品與試劑茅莓總皂苷，環(huán)磷酰胺；多聚甲醛AR；RPMI課題份量和難易程度要恰當(dāng)，博士生能在二年內(nèi)作出結(jié)果，碩士生能在一年內(nèi)作出結(jié)果，特別是對實驗條件等要有恰當(dāng)?shù)墓烙?。從本學(xué)科出發(fā)，應(yīng)著重選對國民經(jīng)濟具有一定實用價值和理論意義的課題。課題具有先進性，便于研究生提出新見解，特別是博士生必須有創(chuàng)新性的成果1640粉末，使用時按要求配制成培養(yǎng)液，并加入10％滅活小牛血清和100μ

3、g鏈霉素；胰蛋白酶，使用時用磷酸鹽緩沖液(PBS)配制成％的溶液；MTT(噻唑蘭)，DMSO(二甲基亞砜)；胎牛血清；PBS將A375人惡性黑色素瘤細胞、HR8348結(jié)腸癌細胞、A431表皮癌細胞和Hut-78人皮膚T細胞淋巴瘤細胞分別與%胰酶、%EDTA混合消化后計數(shù)調(diào)節(jié)細胞為1×105/ml，于96孔板加入18μl，并同時加入不同濃度的藥液20μl/孔。以加入環(huán)磷酰胺及不加藥作對照。CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)48h后，加入噻唑蘭PBS溶液5mg/ml，再培養(yǎng)4h,直接加入二甲基亞砜振蕩10min，于酶標(biāo)儀570nm測A值。茅莓總皂苷對HR8348直腸腺癌細胞細胞周期的影響HR8348直腸腺癌細胞經(jīng)

4、茅莓總皂苷處理后用胰酶消化，PBS洗滌，7０％乙醇固定，置于4℃冰箱內(nèi)過夜。次日用PBS洗2次，調(diào)整細胞濃度至1×106／ml，用PI染液避光染色30min，流式細胞儀FACSCalibur檢測。每樣本檢測10000個細胞，按FACSORT軟件進行曲線擬合分析，計算DNA含量，得出細胞周期(G1、S、G2+M)的百分比。統(tǒng)計學(xué)分析各實驗結(jié)果表示為(x±s),數(shù)據(jù)間差異性統(tǒng)計選用雙側(cè)t檢驗。　　2結(jié)果.1MTT比色法測定茅莓總皂苷對HR8348結(jié)腸癌細胞增殖的影響課題份量和難易程度要恰當(dāng)，博士生能在二年內(nèi)作出結(jié)果，碩士生能在一年內(nèi)作出結(jié)果，特別是對實驗條件等要有恰當(dāng)?shù)墓烙?。從本學(xué)科出發(fā)，應(yīng)著重

5、選對國民經(jīng)濟具有一定實用價值和理論意義的課題。課題具有先進性，便于研究生提出新見解，特別是博士生必須有創(chuàng)新性的成果結(jié)果表明，高、中濃度茅莓總皂苷藥對結(jié)腸癌細胞HR8348增殖有明顯的抑制作用。見表1。表1茅莓總皂苷對HR8348結(jié)腸癌細胞增殖的影響注:與對照組5比較P.2MTT比色法測定茅莓總皂苷對皮膚T細胞淋巴瘤細胞增殖的影響結(jié)果表明，高、中濃度茅莓總皂苷藥對皮膚T細胞淋巴瘤細胞Hut-78增殖有明顯的抑制作用。見表2。表2茅莓總皂苷對皮膚T細胞淋巴瘤細胞增殖的影響注:與對照組5比較P.3MTT比色法測定茅莓總皂苷對A375人惡性黑色素瘤細胞增殖的影響結(jié)果表明，高、中濃度茅莓總皂苷對A

6、375人惡性黑色素瘤細胞增殖有明顯的抑制作用。見表3。表3茅莓總皂苷對黑色素細胞瘤A375細胞增殖的影響注:與對照組5比較P.4MTT比色法測定茅莓總皂苷對人表皮癌A431細胞增殖的影響結(jié)果表明，高、中濃度茅莓總皂苷藥對人表皮癌A431細胞增殖無明顯的抑制作用。見表4。表4茅莓總皂苷對人表皮癌A431細胞增殖的影響注：與對照組5比較P.5茅莓總皂苷對HR8348直腸腺癌細胞周期的影響如表5所示：茅莓總皂苷高、中濃度(1mg%、%)作用于HR8348直腸腺癌細胞72h后，S期細胞分別占和與對照組比較有顯著性差異(P　　3討論近年來的研究課題份量和難易程度要恰當(dāng)，博士生能在二年內(nèi)作出結(jié)果，碩

7、士生能在一年內(nèi)作出結(jié)果，特別是對實驗條件等要有恰當(dāng)?shù)墓烙?。從本學(xué)科出發(fā)，應(yīng)著重選對國民經(jīng)濟具有一定實用價值和理論意義的課題。課題具有先進性，便于研究生提出新見解，特別是博士生必須有創(chuàng)新性的成果表明植物中的三萜皂苷具有較強的抗腫瘤作用［１～３］，多數(shù)已作為抗癌中藥試用于臨床［４］。茅莓作為懸鉤子屬植物僅在民間作為抗腫瘤中草藥應(yīng)用，尤其是消化道腫瘤。近幾年的研究發(fā)現(xiàn)茅莓提取物中含有多種三萜類化合物［５，６］，而國