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1、液相色譜／質譜聯用技術李立軍色譜是快速靈敏分離有機物的有效手段，各種檢測器中，除了應用最廣泛的FID（GC）和UV（LC）外，質譜（MS）盡管價格較昂貴，但是其選擇性、靈敏度、分子量及結構信息等優(yōu)勢，已被公認為高級的通用型檢測器，把它與各種分離手段聯用，將定性、定量結果有機地結合在一起，一直是人們所研究的目標。GC／MS在我國已有20多年的應用歷史，隨著臺式小型儀器迅速增長，在色譜研究中已經成為重要的手段，氣相色譜質譜技術成熟運用至今，人們越來越不滿足僅僅分析那些具有揮發(fā)性和低分子量的化合物，面對日益增加的
2、大分子量（特別是蛋白，多肽等）和不揮發(fā)化合物的分析任務，迫切需要用液相色譜／質譜聯用解決實際間題。與氣相色譜相比，液相色譜的分離能力有著不可比擬的優(yōu)勢，液相色譜／質譜聯用技術為人們認識和改造自然提供了強有力的工具。HPLC可以直接分離難揮發(fā)、大分子、強極性及熱穩(wěn)定性差的化合物，LC／MS聯機曾長期為分析界所期待，由于LC流動相與MS傳統(tǒng)電離源的高真空難以相容，還要在溫和的條件下使樣品帶上電荷而樣品本身不分解，大量的樣品不得不采取脫機方式MS鑒定，或制成衍生物用GC／MS分析。經過努力相繼出現了多種液相色譜／
3、質譜聯用接口，實現了液相色譜／質譜的聯用。特別是大氣壓電離質譜（APIMS）的實現為LC／MS的兼容創(chuàng)造了機會，商品化的小型LC／MS作為成熟的常規(guī)分析儀器在九十年代已經在生物醫(yī)藥實驗室發(fā)揮著重要的作用。一．液相色譜／質譜聯用適用范圍液相色譜／質譜聯用的基本流程為：混合的樣品經高效液相色譜柱分離后成為多個單一組分，依次通過液相色譜／質譜接口進入質譜儀的離子源，離子化后的樣品經過質量分析器分析后由檢測系統(tǒng)記錄，后經數據系統(tǒng)采集處理，得到帶有結構信息的質譜圖。圖1液相色譜／質譜聯用的基本流程首先看看氣相色譜／質
4、譜聯用的特點：
·要求樣品氣化后進入質譜儀
·用電子轟擊方式（EI）得到的譜圖，可與標準譜庫對比
·用毛細管色譜柱分離化合物，分高效率高
·操作條件穩(wěn)定、使用方法成熟
·適宜分析小分子、易揮發(fā)、熱穩(wěn)定的化合物
液相色譜／質譜聯用主要可解決如下幾方面的問題：
①不揮發(fā)性化合物分析測定；
②極性化合物的分析測定；③熱不穩(wěn)定化合物的分析測定；④大分子量化合物（包括蛋白、多肽、多糖、多聚物等）的分析測定；附圖清楚地表明了各種接口技術的適用范圍。
二．液相色譜／質譜接口的發(fā)展
起步于70年代，先后研究出27種接口
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5、．傳送帶（MB）LC／MS接口方式七十年代末采用傳送帶方式與MS傳統(tǒng)的EI，CI離子源相聯。靈敏度差，不能用反相柱，待測樣品必須汽化后再電離。中國至少買了8臺，現已淘汰。
2．熱噴霧（TS）
產生于八十年代中期，不僅是LC／MS接口，也是軟電離方式，熱噴霧時LC流出液經過高溫加熱而超高速噴霧，產生的離子進入MS，中性分子由真空泵抽走。TS只能獲得與分子量有關的信息。在熱噴射過程中會使熱不穩(wěn)定化合物分解，在一定程度上被API取代。3．粒子束（PB）利用溶劑與被分析物的動量差分離（與氣相色譜／質譜儀上的玻璃噴嘴
6、分離器原理相似），進入質譜后用EI或CI方式電離，優(yōu)點是能提供傳統(tǒng)的EI和CI質譜圖。4．連續(xù)流動快原子轟擊（CFFAB）與靜態(tài)的快原子轟擊（FAB）類似。5．大氣壓電離（API）（接口與電離相結合）八十年代后期出現，大氣壓電離源顧名思義是一種常壓電離技術，在大氣壓下電離，僅把帶電離子“吸入”質譜，不能提供經典的質譜圖。目前大氣壓電離特指：電噴霧（ESI），離子噴霧（IS）和大氣壓化學電離（APCI）。由于它不需要真空、減少了許多設備，方便使用，而且有下面的優(yōu)點，因而在近年來得到了迅速的發(fā)展。(1).由于產
7、生多電荷離子（在ESI和IS下），測定分子量可以達到10萬道爾頓以上(2)．靈敏度達fg-pg(3)．適用于極性和離子型化合物(4)．進樣方式多樣靈活a）直接流動進樣b）與液相色譜聯用c）與毛細管電泳聯用三．接口原理1．電噴霧電離(ESI)電噴霧電離是一種“軟”電離技術，ESI－MS既可分析小分子也可分析大分子。對于分子量在1000Dalton（簡寫為Da,現法定計量單位寫為u）以下的小分子，會產生[M＋H]+或[M-H]-離子，選擇相應的正離子或負離子形式進行檢測，就可得到物質的分子量。此外，也可能源內C
8、ID生成一些碎片，有利于提供樣品分子的結構信息。而分子量高達20，000u的大分子在ESI-MS中常常生成一系列多電荷離子，通過數據處理系統(tǒng)能夠得到樣品的分子量，準確度優(yōu)于±0．01％。(1)．電噴霧機理電噴霧電離是在液滴變成蒸汽產生離子發(fā)射的過程中形成的，這種過程也稱為“離子蒸發(fā)”，如圖2所示。溶劑由泵輸送從不銹鋼毛細管流出，由于它帶3—5kV高壓，與對應極之間產生的強電場促使溶劑在毛細管出口端發(fā)生噴霧，產生帶
