hplc法測定不同產(chǎn)地甘草中甘草酸的含量論文

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1、HPLC法測定不同產(chǎn)地甘草中甘草酸的含量論文【摘要】目的用HPLC法測定甘草中甘草酸的含量。方法以C18柱（4.6mm×15cm，5μm）為分析柱，乙腈2％醋酸溶液（36∶64）為流動相；流速為0.6ml/min,柱溫25℃，紫外檢測波長為250nm，采用外表法定量測定。結(jié)果表明甘草酸在0.1630～0.8149μg范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系(r=0.9999)。其平均加樣回收率為99.76%，RSD為0.96%(n=5)。結(jié)論本方法簡便可靠，重現(xiàn)性好，可作為甘草酸的質(zhì)量控制方法。【關(guān)鍵詞】甘草甘草酸高效液相色譜法含量測定【Abstract】Obj

2、ectiveTosetupaHPLCmethodforthedeterminationoftheglycyrrhizicacidinlicoricefromdifferentregions.MethodsAC18column（4.6mm×15cm.freel）obilephaseconsistingofacetonitrile2%aceticacid(36∶64).Theflol/min,thetemperatureofcolumn.Todeterminatethequantitativeassayusingexternalsatadardme

3、thod.ResultsThelinearofglycyrrhizicacidethodple,convenient,andination甘草為豆科多年生草本植物，始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，素有“國老”之稱，是我國一味非常重要的中藥材，具補脾益氣、清熱解毒、祛痰止咳、緩急止痛、調(diào)和諸藥之功效［1，2］。甘草中含有甘草酸和甘草苷等物質(zhì)，其中甘草酸是最重要的活性成分［3，4］，具有抗炎、抗?jié)?、抗肝毒素以及抗癌等藥理作用。目前，還發(fā)現(xiàn)其具有體外抗甲肝病毒、人體免疫缺陷病毒和SARs病毒的活性，臨床上用于治療慢性肝炎和艾滋?。?，6］?！吨兴幩幍洹肥蛰d的品

4、種為甘草的干燥根及根莖［7］。但實際上，商品甘草的產(chǎn)地來源復雜，其有效成分甘草酸的含量也存在很大差異。為此，本文作者以甘草中有效成分甘草酸為檢測指標，采用HPLC法，對甘肅和山東4個產(chǎn)地的甘草進行了初步的分析研究。1材料與方法1.1儀器HP1100高效液相色譜儀，YCQ300超聲波清洗器（上海凱波超聲設(shè)備有限公司），ADER182A型電子天平。1.2試藥與方法甘草酸單銨鹽（由中國藥品生物制品檢定所提供，批號07049912）；甘草樣品經(jīng)本實驗室鑒定為豆科植物的干燥根及根莖；甲醇、乙腈為色譜純；95%乙醇、無水乙醇均為分析純；冰醋酸為優(yōu)級純；

5、水為雙蒸水。1.2.1色譜條件：用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑（C18柱，4.6mm×15cm，5μm）；乙腈2％醋酸溶液（36∶64）為流動相；流速為0.6ml/min；柱溫25℃；紫外檢測波長為250nm。1.2.2對照品溶液的制備：取甘草酸單銨鹽對照品10mg，精密稱定，置50ml量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻；再精密吸取2ml置10ml量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。每1ml甘草酸單銨鹽對照品0.0416mg，折合甘草酸為0.0407mg。1.2.3供試品溶液的制備：取本品內(nèi)容物0.5g，精密稱定，加50ml甲醇，超聲處理4

6、5min，放冷，濾過，置100ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻即得。1.2.4標準曲線及線形范圍：分別精密吸取對照品溶液4.0、8.0、12.0、15.0、20.0μl，注入液相色譜儀，在上述色譜條件下測定。以對照品進樣量（μg）為橫坐標，5次測得的峰面積積分值為縱坐標，繪制標準曲線，見表1。得回歸方程為Y=1062108X＋30988(r=0.9999)。結(jié)果表明甘草進樣量在0.1630～0.8149μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。表1甘草酸標準曲線數(shù)據(jù)進樣量1.2.5精密度實驗：精密吸取同一對照品溶液10μl，重復進樣5次，記錄色譜圖，以峰面積計算其R

7、SD為0.72%，說明儀器操作過程中精密度良好。1.2.6穩(wěn)定性：取甘草藥材按供試品溶液制備項下的方法制備供試品溶液，分別在0、2、4、6、8、10、12h進樣，每次進樣10μl，測定甘草酸峰面積計算含量，得甘草酸的RSD為0.95%。1.2.7重現(xiàn)性：取甘草藥材按供試品溶液制備項下的方法制備5份供試品液，分別進樣，每次進樣10μl，測定甘草酸峰面積，計算含量，得甘草酸的RSD為1.04%。1.2.8加樣回收率：精密稱取已知含量的甘草藥材適量，分別精密加入一定量的甘草酸對照品，結(jié)果甘草酸的平均加樣回收率為99.76%,.freelin）對提取的影

8、響，結(jié)果顯示超聲處理45min，獲得的色譜圖出峰多，且分離度、分辨率都較為理想［8］。3.2檢測波長本實驗采用250nm作為檢測波長，也