資源描述：
《溺毒清合劑延緩慢性腎功能衰竭的實驗研究.doc》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫。
1、溺毒清合劑延緩慢性腎功能衰竭的實驗研究周富明李玉卿韋先進費德升張忠賢張雪峰丁偉偉成信法陳華摘要：目的：探討溺毒清合劑延緩慢性腎衰的作用機理。方法：采用5/6腎切除造模方法復(fù)制大鼠慢性腎功能衰竭模型，實驗分為假手術(shù)組、模型組、溺毒清低劑量組（簡稱溺低組）、溺毒清高劑量組（簡稱溺高組）、厄貝沙坦對照組（簡稱厄貝組）。對各組進行干預(yù)治療，然后觀察其腎功能變化。并進行血清超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛(MDA）、一氧化氮(NO）、一氧化氮酶(ET-1）檢測，并對腎組織經(jīng)行IV膠原、纖維連接蛋白(FN）、基質(zhì)金屬蛋白酶-2(MMP-2）、轉(zhuǎn)化生
2、長因子-β(TGF-β）等免疫組化檢測，最后行腎組織病理檢查。結(jié)果：溺毒清合劑可顯著降低CRF大鼠ET-1，升高NO，對MDA、SOD差異無統(tǒng)計學意義，改善腎功能方面與厄貝沙坦相當。免疫組化顯示溺毒清高劑量組比模型組IV膠原、FN、MMP-2、TGF-β表達減少。結(jié)論：溺毒清合劑可顯著改善CRF大鼠的腎功能，可能與其改善腎血流，降低血漿ET-1升高NO水平，從而抑制腎小球系膜細胞及間質(zhì)細胞增值，通過降解Ⅳ型膠原等細胞外基質(zhì)而抑制5／6腎切除大鼠殘腎組織腎小球硬化，從而延緩慢性腎衰進展，與厄貝沙坦有相近的腎臟保護作用。關(guān)鍵詞：溺毒清合劑；
3、慢性腎衰竭；大鼠；慢性腎功能衰竭（chronicrenalfailure，CRF）是危害人們身體健康的危重病之一。我們根據(jù)其臨床表現(xiàn)，以中醫(yī)理論為指導(dǎo)，衷中參西，研制成溺毒劑用于CRF，經(jīng)臨床觀察溺毒清合劑對CRF患者改善癥狀、延緩腎衰竭進展療效理想。為了探討溺毒清合劑治療慢性腎衰的作用機理，我們進行了相關(guān)的動物實驗。材料與方法1材料1.1實驗藥物：溺毒清合劑（黃芪、制大黃、仙靈脾、丹參、附片、牡蠣）組成，按臨床處方比例制成，制劑方法參照文獻[1]。溺毒清合劑低劑量組每毫升含生藥0.75g，溺毒清合劑高劑量組每毫升含生藥1.5g/ml，
4、4℃冰箱保存。對照組服用藥物：厄貝沙坦：江蘇恒瑞藥業(yè)股份有限公司生產(chǎn)，150mg/片，制成混懸液，每毫升含原藥10mg。1.2實驗動物：選用50只雄性的體重為（200±20）g的SD大鼠（浙江中醫(yī)藥大學提供）。1.3實驗環(huán)境：浙江中醫(yī)藥大學實驗動物中心清潔級大鼠飼養(yǎng)室。1.4主要試劑及儀器：日本產(chǎn)7020自動生化分析儀，日本希森Ｋ21自動生化分析儀，752分光光度計，SOD、MDA、NO、ET-1試劑盒，南京建成生物工程研究所提供。2方法2.1模型制作：50只大鼠先飼養(yǎng)一周，然后隨機抽出10只作為假手術(shù)組，其余40只在腹腔注射麻醉下，對
5、左側(cè)腎臟進行大部分切除，所切除部分重量占單側(cè)腎臟重量的2/3(0.6～0.7g)，術(shù)后兩周對右側(cè)腎臟進行全部切除。隨機抽出的10只大鼠同樣進行以上造模步驟，但不切除腎臟。2.2實驗分組：除假手術(shù)組外，造模后大鼠隨機分為4個組即：模型組、溺毒清低劑量組（簡稱溺低組）、溺毒清高劑量組（簡稱溺高組）、厄貝沙坦對照組（簡稱厄貝組）。2.3用藥方法：分好組后實驗大鼠以每籠5～6只飼養(yǎng)，自動飲水，自由進食，飼料予以普通飼料。溺毒清合劑低劑量組每日灌服含生藥0.75g/ml溺毒清合劑1.0ml/100gBW，給藥劑量為7.5g/kg（為臨床給藥劑量的
6、10倍）；溺毒清合劑高劑量組每日灌服含生藥1.5g/ml溺毒清合劑1.0ml/100gBW，給藥劑量為15g/kg（為臨床給藥劑量的20倍）；厄貝沙坦對照組每日灌服含10mg/ml的厄貝沙坦溶液1.0ml/100gBW，給藥劑量為50mg/kg（為臨床給藥劑量的10倍）。假手術(shù)組、模型對照組均每日灌服無菌蒸餾水1.0ml/100gBW。2.4觀察指標及檢測方法：給藥8周后，各組大鼠上代謝籠，測定大鼠的采食量、飲水量和尿量，并測定尿液中肌酐、尿素氮和總蛋白；用3%戊巴比妥鈉50mg/kg腹腔注射麻醉大鼠，心臟采血6ml，分離血清，自動生化
7、儀測定血肌酐、尿素氮、膽固醇、三酰甘油，取腎臟標本甲醛固定，石蠟包埋，免疫組化查Ⅳ型膠原、纖維連接蛋白(FN),轉(zhuǎn)化生長因子（TGF-β1）、基質(zhì)金屬蛋白酶-2(MMP2)；超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）、一氧化氮（NO）、一氧化氮酶（ET-10檢測，在浙江中醫(yī)藥大學實驗動物中心檢驗室進行檢測，嚴格按照試劑盒說明操作。腎臟標本用中性甲醛固定，石蠟包埋，常規(guī)蘇木-伊紅（HE）染色，切片3μm，光鏡下觀察。均有浙江中醫(yī)藥大學協(xié)助完成。2.5免疫組化檢測：用SABC法測定腎組織中Ⅳ型膠原、FN,TGF-β1、MMP-2的表達。采用
8、圖像分析系統(tǒng)，系統(tǒng)定標，每張標本按順序選5個視野，計算每個視野內(nèi)染色區(qū)域的面積及積分光密度，以均值計算每個標本的面積及積分總光密度，最后以每組的均值進行比較。3統(tǒng)計方法用SPSS13.0統(tǒng)計軟件計算，所有數(shù)
