多重耐藥肺炎克雷伯菌氨基糖苷類(lèi)藥物耐藥相關(guān)基因研究論文

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1、多重耐藥肺炎克雷伯菌氨基糖苷類(lèi)藥物耐藥相關(guān)基因研究論文戴學(xué)海，王華鈞，金法祥，陳秋美【摘要】目的：了解多重耐藥肺炎克雷伯菌氨基糖苷類(lèi)修飾酶基因的存在狀況。方法：自2006年1月至2006年10月住院病人標(biāo)本中分離并篩選出20株多重耐藥肺炎克雷伯菌，微量肉湯稀釋法檢測(cè)20種抗菌藥物的敏感性;PCR法檢測(cè)15種氨基糖苷類(lèi)修飾酶基因。結(jié)果：20株多重耐藥肺炎克雷伯菌對(duì)氨基糖苷類(lèi)藥物慶大霉素、妥布霉素、奈替米星及阿米卡星耐藥率分別為75%、80%、65%和60%，其中氨基糖苷類(lèi)修飾酶aac(3)-Ⅱ基因陽(yáng)性15株，aac(6’)-Ⅰb基因陽(yáng)性1株，ant(

2、3”)-Ⅰ基因陽(yáng)性16株.freelinoglycosidemodifyingenzymeinmulti-resistantKlebsiellapneumoniae.Methods:Samplesof20strainsofmulti-resistantKlebsiellapneumoniaecollectedfromthepatientsfromJanuary2006toOctober2006eansofbrothinductioninoglycosidemodifyingenzymebyerasechainreactionulti-resista

3、ntKlebsiellapneumoniaetoaminoglycoside，suchasgentamicin，tobramycin，ilmicinandamikacininoglycosidemodifyingenzymeaac(3’)-Ⅱgenepositive，1strainofaac(6’)-Ib，16onesofant(3”)-Ⅰ，3onesofaph(3’)-Ⅰand1strainofant(2”)etime.Conculsion:Themainreasonsofmulti-resistantKlebsiellapneumoniaere

4、sistancetoaminoglycosidearethepresenceofaminoglycosidemodifyingenzymescalledaac(3)-Ⅱ，aac(6”)-Ib，ant(3”)-Ⅰ，aph(3’)-Ⅰandant(2”)-Ⅰgenes.Genesofaac(6’)-Ib-Crandaph(3’)-ⅠinKlebsiellapneumoniaearebothfirstfoundandreportedinChina.Keyoniae;aminoglycosidemodifyingenzyme;multidrugresist

5、ance肺炎克雷伯菌(K.pneumoniae，KPN)已是醫(yī)院感染的重要病原菌。近年盡管?chē)?guó)內(nèi)已有KPN菌的氨基糖苷類(lèi)藥物部分耐藥相關(guān)基因研究報(bào)道1-2，但報(bào)道所涉及耐藥相關(guān)基因較少。我們?cè)鴪?bào)道了一組老年患者KPN菌分離株β-內(nèi)酰胺酶基因分型研究3，為進(jìn)一步了解我院多重耐藥KPN菌氨基糖苷類(lèi)藥物各種耐藥相關(guān)基因存在狀況，我們對(duì)20株分離自老年病房產(chǎn)β-內(nèi)酰胺酶的KPN菌進(jìn)行了15種氨基糖苷類(lèi)修飾酶基因檢測(cè)，現(xiàn)報(bào)告如下。1材料和方法1.1菌株來(lái)源及鑒定20株均為分離自2006年1月-2006年10月間我院老年病房患者(年齡61～90歲)臨床標(biāo)本，分別

6、為：痰液13份，尿液6份，膽汁1份。全部菌株均使用ATB細(xì)菌鑒定儀鑒定菌種。1.2抗菌藥物敏感性試驗(yàn)藥敏試驗(yàn)按美國(guó)CLSI2006年版要求。質(zhì)控菌株：大腸埃希菌ATCC25922、肺炎克雷伯菌ATCC700603、銅綠假單胞菌ATCC27853購(gòu)自衛(wèi)生部臨床檢驗(yàn)中心，抗菌藥物敏感試驗(yàn)采用微量肉湯稀釋法。1.3細(xì)菌處理挑純培養(yǎng)菌落置入0.5mL離心管內(nèi)(內(nèi)預(yù)置200ng/mL蛋白酶K溶液200μL)，56℃水浴2h，改95℃水浴10min，離心(15000r/min)30s。上清液即為基因檢測(cè)的模板液，-20℃冰箱保存?zhèn)溆谩?.4基因PCR檢測(cè)15種

7、氨基糖苷類(lèi)修飾酶基因檢測(cè)均為PCR法，靶基因引物序列和目的產(chǎn)物長(zhǎng)度見(jiàn)表1。各種靶基因PCR擴(kuò)增體系均為:每反應(yīng)體系P1引物1μL(1.0μmmol/L)、P2引物1μL(1.0μmmol/L)，dNTPs2μL(2mmol/L)，10倍緩沖液2μL(KCl10mmol/L，(NH4)2SO48mmol/L，MgCl22mmol/L，Tris-HCl(pH9.0)10mmol/L，NP400.5%，BSA0.02%(in，然后93℃30s→55℃30s→72℃60s，循環(huán)35周期，最后一個(gè)72℃延長(zhǎng)至5min。PCR產(chǎn)物長(zhǎng)度500bp者PCR擴(kuò)增熱循

8、環(huán)參數(shù)為：93℃預(yù)變性2min，然后93℃60s→55℃60s→72℃60s，循環(huán)35周期，最后一個(gè)72℃延長(zhǎng)至5min。