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1、紫外分光光度法測(cè)定云南紅豆杉枝葉中總黃酮的含量論文孔繁晟嚴(yán)春艷賁永光李坤平羅佳波【摘要】目的建立云南紅豆杉枝葉中總黃酮含量的測(cè)定方法。方法采用紫外分光光度法，檢測(cè)波長(zhǎng)為272nm。結(jié)果總黃酮檢測(cè)濃度在12～28μg/ml（r=0.9992）范圍內(nèi)與吸光度線性關(guān)系良好，平均加樣回收率為96.04%，RSD為2.7%。結(jié)論該方法用于云南紅豆杉枝葉中總黃酮的含量測(cè)定，方法穩(wěn)定，結(jié)果準(zhǔn)確、可靠?！娟P(guān)鍵詞】紫外分光光度法；紅豆杉；總黃酮Abstract:ObjectiveToestablishamethodforthedeterminationoftotalflavonoi
2、dsinbranchesandleavesofTaxusyunnanensis．MethodsTheassayedbyspectrophotometricmethod．ResultsThelineardetectionconcentrationrangeoftotalflavonoidsl（r=0.9992），averagerecoveryethodisaccurate.freelinationoftotalflavonoidsinbranchesandleavesofTaxusYunnanensis.Keyetry；Taxus；Totalflavonoids紅豆
3、杉(Taxus)屬裸子植物紫杉綱紅豆杉科(Taxaceae)的常綠喬木，共11種，分布于北半球，我國(guó)有4種和1個(gè)變種［1］。紫杉屬植物中含有的主要抗癌活性成分是以紫杉醇為主的二萜類化合物。隨著研究的不斷深入，黃酮類化合物也顯示出了良好的抗癌效果［2，3］。據(jù)報(bào)道，紅豆杉中也有著多種黃酮類成分［4，5］，故研究紅豆杉中的黃酮類成分對(duì)保護(hù)稀有樹種紅豆杉，提高其資源利用率有著積極意義，但有關(guān)紅豆杉總黃酮含量測(cè)定目前尚未見準(zhǔn)確報(bào)道。本研究用紫外分光光度法對(duì)紅豆杉中的總黃酮進(jìn)行測(cè)定，并進(jìn)行了方法學(xué)的考察，以期為紅豆杉中黃酮類化合物的開發(fā)和利用提供科學(xué)依據(jù)。1儀器與試藥Agi
4、lent1100高效液相色譜儀；HPUV-8453型可見紫外分光光度計(jì)；SartoriusCp3245型天平；KQ-500DE型醫(yī)用數(shù)控超聲儀；DHG-9140A電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱；LABOROTA4000旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，LG10-2.4A離心機(jī)。金松雙黃酮對(duì)照品（自制，HPLC純度95%）；甲醇為色譜純。其余試劑均為分析純。藥材為云南紅豆杉（TaxusyunnanensisChengetL.K.Fu）的枝葉采自云南大理云龍縣，經(jīng)南方醫(yī)科大學(xué)生藥學(xué)教研室鑒定。2方法與結(jié)果2.1對(duì)照品溶液的配制金松雙黃酮為紅豆杉中生理活性較好的黃酮類成分，故以此作為總黃酮測(cè)定中的對(duì)照品
5、較具有代表性。精密稱取干燥至恒重的金松雙黃酮2mg，置50ml容量瓶中，加甲醇30ml，超聲振蕩使溶解，放冷至室溫，甲醇定容至刻度，搖勻，得濃度為40μg/ml的對(duì)照品儲(chǔ)備液。2.2供試品溶液的配制準(zhǔn)確稱取紅豆杉藥材粉末1g，加石油醚25ml，超聲提取30min，抽濾，重復(fù)提取1次,濾液棄去。藥渣揮干石油醚殘液,加甲醇25ml，超聲提取30min，抽濾，重復(fù)兩次，濾液合并濃縮,置10ml容量瓶中，加甲醇定容至刻度，搖勻。2.3最大吸收波長(zhǎng)的選擇取對(duì)照品溶液和提取溶液進(jìn)行波長(zhǎng)掃描（圖1～2），對(duì)照品與供試品溶液在272nm附近處吸收較強(qiáng)，故選擇272nm作為測(cè)定波長(zhǎng)
6、。圖1對(duì)照品紫外掃描光譜（略）圖2提取液紫外掃描光譜（略）2.4標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制精密量取金松雙黃酮對(duì)照品溶液0.0，3.0，4.0，5.0，6.0，7.0ml,分別置于10ml容量瓶中，甲醇定容至刻度。用紫外-可見分光光度計(jì)于272nm處測(cè)定吸光度值,以吸光度(A)對(duì)濃度(C)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程：C=1.55+29.16A，r=0.9992，在12～28μg/ml范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。2.5精密度實(shí)驗(yàn)取金松雙黃酮對(duì)照品溶液5ml5份，在272nm處測(cè)吸光度，吸光度平均值為0.5766，RSD為0.82%，表明該儀器精密度良好。2.6重復(fù)性實(shí)驗(yàn)精密稱取藥材樣品1g
7、共5份，按照“2.2”項(xiàng)下條件平行實(shí)驗(yàn),依法處理，在272nm處測(cè)定吸光度。結(jié)果，平均含量為5.14%，RSD=2.08%。結(jié)果表明，本方法重現(xiàn)性良好。2.7加樣回收率實(shí)驗(yàn)稱取已知含量的藥材約0.2g共5份，于60℃干燥至恒重，精密稱重，置50ml磨口錐形瓶中，加入金松雙黃酮對(duì)照品10mg，按照“2.2”項(xiàng)依法處理，測(cè)定272nm處吸光值，以相應(yīng)試劑為空白，按對(duì)照品的回歸方程進(jìn)行計(jì)算處理，回收率平均值為96.04%，RSD為2.7%。結(jié)果見表1。表1加樣回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果（略）2.8穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)取“2.5”項(xiàng)下5號(hào)樣品，于0，10，30，60，90，120min，測(cè)定吸
8、光值，平均
