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1、紫外分光光度法測(cè)定絡(luò)石藤中總黃酮含量論文饒金華，劉文英，江佳峪【關(guān)鍵詞】高效液相色譜法；,,淫羊藿多糖；,,衍生化；,,單糖摘要：目的測(cè)定淫羊藿多糖(EPS)中單糖的組成及其摩爾比。方法將淫羊藿多糖樣品用1mol/L硫酸溶液降解成單糖后,用1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(PMP)衍生,通過簡(jiǎn)化衍生方法,優(yōu)化分析條件,采用反相高效液相色譜250nm紫外檢測(cè)和使用梯度洗脫,分離測(cè)定各單糖。結(jié)果淫羊藿多糖由甘露糖、鼠李糖、半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖6種單糖組成，其物質(zhì)的量之比為0.60∶0.74∶1.00
2、∶0.29∶2.29∶1.43。結(jié)論該改進(jìn)后的衍生化方法以及優(yōu)化的高效液相色譜法具有簡(jiǎn)單、快速、重現(xiàn)性好等特點(diǎn),可用于淫羊藿多糖中單糖組成的測(cè)定。關(guān)鍵詞：高效液相色譜法；淫羊藿多糖；衍生化；單糖Abstract：ObjectiveTodeterminethemonosaccharidesintheEpimediumpolysaccharide(EPS)andtheirmolarratio.MethodsTheEpimediumpolysaccharideonosaccharidesol/Lsulfuricaci
3、d.Themonosaccharidederivativesobtainedethyl-5-pyrazolone(PMP)onitoredbyultravioletdetectorat250nm.ResultsSixmonosaccharidesderivativesediumpolysaccharideisposedofmannose,rhamnose,galacturonicacid,glucose,galactose,andarabonose,olarratioof0.60∶0.74∶1.00∶0.29∶
4、2.29∶1.43.ConclusionThismethodhasaccurateresultandgoodreproducibilityandcanbeusedtodeterminethemonosaccharidesinEpimediumpolysaccharide.KeyediumPolysaccharide;Derivation;Monosaccharide淫羊藿多糖(EPS)是從小檗科植物淫羊藿Epimedium中分離得到的一種酸性雜多糖，含量約占生品的2%［1］。淫羊藿多糖具有廣泛的藥理學(xué)活性，有免
5、疫調(diào)節(jié)作用以及刺激骨髓DNA合成、增強(qiáng)血小板聚集等作用［2］。目前有關(guān)淫羊藿多糖的研究報(bào)道大多為藥理活性研究以及傳統(tǒng)的硫酸-苯酚法、蒽酮-硫酸法測(cè)定含量［3］，其單糖組成迄今未見報(bào)道，而多糖的單糖組成分析是進(jìn)行多糖質(zhì)量控制和獲取多糖基本信息的重要環(huán)節(jié)。多糖樣品的單糖組成分析常用的方法包括薄層色譜法、氣相色譜法和液相色譜法。薄層色譜法微量成分顯色不明顯而且重現(xiàn)性不好;氣相色譜法操作繁雜、費(fèi)時(shí);液相色譜法操作簡(jiǎn)單快速。本實(shí)驗(yàn)采用1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(PMP)柱前衍生.freelStations色譜工作站
6、。1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮（PMP，甲醇重結(jié)晶兩次，上海化學(xué)試劑采購供應(yīng)站試劑廠）；乙腈(色譜純,MERCK公司)。單糖對(duì)照品：葡萄糖（Glc，上?；菖d生化試劑有限公司）、阿拉伯糖（Arab，Sigma公司）、半乳糖（Gal，Amresco公司，北京經(jīng)科公司分裝）、鼠李糖（Rham，EnglandB.D.HLaboratoryChemicalsGroup）、甘露糖（Mannose，Supelco公司）、巖藻糖（Fuc，F(xiàn)luka公司）、半乳糖醛酸（GalUA，F(xiàn)luka公司），其余試劑均為國產(chǎn)分析純。淫
7、羊藿多糖（EPS）由本實(shí)驗(yàn)室分離純化,經(jīng)紫外光譜分析,不含蛋白質(zhì)和核酸類物質(zhì)，紅外光譜具有多糖特征吸收。2方法2.1色譜條件色譜柱為PhenomenexC18(250mm×4.6mm，5μm)；流動(dòng)相為溶劑A，15%（V/V）乙腈+20mmol/L乙酸銨水溶液，溶劑B，40%（V/V）乙腈+20mmol/L乙酸銨水溶液；梯度模式：時(shí)間梯度為0min→25min，相應(yīng)濃度梯度為0%→50%溶劑B。檢測(cè)波長(zhǎng)250nm；流速1.2ml/min；進(jìn)樣體積20μl;柱溫為室溫。2.2多糖的水解稱取20mg淫羊藿多糖置于安
8、瓿管中,加入濃度為1mol/L硫酸溶液2.0ml,封管后于100℃水解6h,得水解樣品溶液。用2mol/L氫氧化鈉水溶液中和至pH值為7.0,并以純化水稀釋到5.0ml,離心,取上清液待衍生化。2.3單糖標(biāo)準(zhǔn)品的衍生化取濃度分別為1.0mmol/L的甘露糖(Man)、鼠李糖(Rham)、半乳糖醛酸(GalUA)、葡萄糖(Glc)、半乳糖(Gal)、阿拉伯糖(Arab)和內(nèi)標(biāo)巖藻糖(Fu
