枸杞子多糖提取工藝優(yōu)化及體外抗氧化活性研究

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1、枸杞子多糖提取工藝優(yōu)化及體外抗氧化活性研究作者：劉長建姜波劉亮范圣第【摘要】目的研究枸杞子多糖的提取及抗氧化活性。方法采用水提法提取枸杞子中的多糖，通過正交實(shí)驗(yàn)研究了固液比、提取溫度、提取時(shí)間對(duì)枸杞子多糖提取得率的影響，并進(jìn)行了提取次數(shù)實(shí)驗(yàn)。采用羥基自由基、超氧陰離子自由基體系，對(duì)枸杞子多糖的抗氧化活性進(jìn)行了研究，并與維生素C進(jìn)行了比較。結(jié)果確立了水提法提取枸杞子多糖的最佳工藝條件為提取溫度80℃，固液比1∶30，提取時(shí)間3.5h，提取2次。當(dāng)多糖濃度達(dá)到229.5μg/ml時(shí)，清除率達(dá)到48.1%，維生素C的清除率為41.2%。對(duì)超氧陰離子自

2、由基的清除率低于維生素C，當(dāng)多糖濃度達(dá)到229.5μg/ml時(shí)，清除率達(dá)到13.5%，維生素C的清除率為48.6%。結(jié)論該方法簡單、環(huán)保，枸杞子中多糖含量為8.34%。枸杞子多糖對(duì)這兩種自由基均有不同的抑制作用。對(duì)羥基自由基的清除率高于維生素C?！娟P(guān)鍵詞】枸杞子多糖提取正交實(shí)驗(yàn)抗氧化活性枸杞子為茄科（Solanaceae）植物枸杞LyciumchinenseMill的成熟果實(shí)，是我國傳統(tǒng)的滋補(bǔ)中藥材。《本草綱目》中記載枸杞子具有堅(jiān)筋骨、補(bǔ)精氣諸不足、明目安神、令人長壽等功效［1］。近年來的研究發(fā)現(xiàn)，植物多糖具有抗腫瘤、增強(qiáng)機(jī)體免疫力等功效，已是

3、當(dāng)前國內(nèi)外研究的熱點(diǎn)［2～5］。目前人們對(duì)枸杞子多糖進(jìn)行了較廣泛的研究，發(fā)現(xiàn)枸杞多糖具有增強(qiáng)機(jī)體免疫力、抗腫瘤、抗衰老、降血脂、降血糖、抗疲勞、護(hù)肝、防輻射、抗缺氧等功效［6～8］，同時(shí)對(duì)多糖的分離與純化進(jìn)行了一些研究［9，10］，但對(duì)提取的工藝條件研究較少。本文對(duì)影響枸杞子多糖提取因素進(jìn)行了正交實(shí)驗(yàn)，優(yōu)選出最佳的枸杞子多糖提取的工藝參數(shù)，同時(shí)進(jìn)行了枸杞子多糖的體外抗氧化活性研究，以期為研究開發(fā)枸杞子多糖新的藥物功能及保健食品提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)?！　?材料與方法　　1.1儀器與試劑上海尤尼柯儀器有限公司產(chǎn)in離心18min，得上清液，經(jīng)濃縮，再加入5

4、倍體積的乙醇，搖勻后，在4℃冰箱中放置過夜，以4000r/min離心20min。沉淀經(jīng)干燥后得到粗多糖。采用硫酸－苯酚法［11］測(cè)定所提取的枸杞子多糖中多糖含量，然后根據(jù)所用枸杞子的質(zhì)量（2g）計(jì)算出枸杞子中多糖得率?！　?.3.2正交實(shí)驗(yàn)選用L9（33）正交實(shí)驗(yàn)，確定提取枸杞子多糖的最佳工藝參數(shù)，水平因素見表1?！　”?正交水平（略）　　1.3.3多糖含量測(cè)定采用硫酸-苯酚法測(cè)定提取的枸杞子多糖含量［11］，葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線的相關(guān)系數(shù)為0.9988，線性方程為Y=0.007X?！　∮蓸?biāo)準(zhǔn)曲線查出樣品中多糖濃度，由下列公式計(jì)算樣品枸杞子中多糖含量

5、。　　多糖含量（%）=樣品濃度×稀釋倍數(shù)×樣品體積多糖試樣質(zhì)量×100%　　枸杞子多糖得率（%）=計(jì)算測(cè)得多糖的質(zhì)量枸杞子樣品質(zhì)量（2g)×100%　　1.4體外抗氧化活性［12］　　1.4.1羥基自由基體系利用Eenton體系測(cè)定枸杞子多糖對(duì)亞鐵離子催化過氧化氫產(chǎn)生·OH的清除能力。由于·OH可特異地使番紅花紅褪色，根據(jù)褪色程度用比色法測(cè)量·OH含量。每支試管分別加入0.15mol/LpH=7.4磷酸緩沖液1.5ml，260μg/ml番紅花紅0.2ml。1.0mmol/LEDTA-Na2-Fe2+0.7ml，再分別加入一定濃度各級(jí)多糖試樣1.

6、0ml,最后加入2％H2O20.8ml，混勻后于37℃水浴保溫30min?？瞻滓哉麴s水代替試樣，對(duì)照組則以蒸餾水代試樣和EDTA-Na2-Fe2+于520nm測(cè)吸光度值，并以Vc作對(duì)比?！　∏宄蔈（%）=（A樣品-A空白）/（A對(duì)照-A空白）×100﹪　　1.4.2超氧陰離子體系采用鄰苯三酚自氧化法，在一定條件下，鄰苯三酚能夠自氧化產(chǎn)生·O2-，加入一定量的多糖液可對(duì)·O2-產(chǎn)生不同的抑制作用，進(jìn)而導(dǎo)致光吸收值的變化。取0.05mol/LpH8.2Tris-HCl緩沖液5ml于試管中，分別加入1ml一定濃度的各級(jí)多糖試樣液，置于25℃水浴中預(yù)

7、熱20min，再加3mmol/L鄰苯三酚0.4ml，混勻，于25℃水浴中準(zhǔn)確反應(yīng)4min，立即用濃HCl0.5ml終止反應(yīng)，并在320nm處測(cè)吸光度?？瞻讓?duì)照組以相同體積Tris-HCl代替樣品，每個(gè)試管做3個(gè)平行，取平均值，按下式計(jì)算清除率?！　∏宄蔈（﹪）=（A對(duì)照-A樣品）/A對(duì)照×100%　　2結(jié)果與討論　　2.1枸杞子多糖提取　　2.1.1正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果正交實(shí)驗(yàn)提取的枸杞子多糖得率見表2?！　”?正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果（略）　　根據(jù)表2的極差分析可見，各因素對(duì)多糖得率的影響順序?yàn)椋築（溫度）＞C（提取時(shí)間）＞A（固液比），說明在各因素中，水提溫

8、度對(duì)多糖提取率影響最大，然后是提取時(shí)間，最后是固液比。因素A，B以第2水平，C以第3水平為最好。因此，可確定枸杞多糖的提取優(yōu)化條件為A2B2C3，即最