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1、甘草RNA提取方法研究【摘要】 目的從甘草不同組織中提取高質(zhì)量的RNA，為進(jìn)一步合成雙鏈cDNA，構(gòu)建甘草cDNA文庫奠定基礎(chǔ)。方法采用幾種常用方法(高鹽溶液法、LiCl沉淀法、CTAB法和SDS法)提取甘草不同組織的RNA，并以1%瓊脂糖凝膠電泳和A260/A280，A260/A230的值作為指標(biāo)。結(jié)果LiCl沉淀法對于甘草不同組織中的RNA具有更好的提取效果，條帶清晰，完整性較好，且A260/A280和A260/A230值均接近于2.0，根部組織產(chǎn)量達(dá)0.220μg/mg，葉片組織產(chǎn)量達(dá)0.275μg
2、/mg。結(jié)論采用LiCl沉淀法提取甘草不同組織中的RNA具有更好的效果，適于從富含多糖的植物組織中提取RNA?！娟P(guān)鍵詞】甘草RNA提取多糖 Abstract:ObjectiveToisolatethehighqualityRNAfromdifferenttissuesofRadixGlycyrrhizaeefficientlysoastolayafoundationtosynthesizethecDNAandconstructthecDNAlibrary.MethodsTotalRNAdifferentt
3、issuesofRadixGlycyrrhizaebysomefamiliarchloridesedimentation,CTABandSDS.Use1%agarosegelelectrophoresisandUVnumericalvalueofA260/A280andA260/A230asthestandard.ResultsThemethodoflithiumchloridesedimentationhadthebesteffecttoextracttotalRNAfromdifferenttissue
4、s,thebandsgfreshgfreshethodoflithiumchloridesedimentationhasthebesteffecttoextracttotalRNAofdifferenttissues,andthismethodisalsoapplicabletotheplantsuchamylase. Keyylase 甘草(RadixGlycyrrhizae)是一種富含多糖的中藥材，臨床應(yīng)用廣泛。隨著甘草分子研究的不斷深入，探索快速而有效的RNA提取方法，從甘草不同組織中獲得高質(zhì)量的
5、RNA成為了研究的關(guān)鍵，也為進(jìn)一步的研究如構(gòu)建cDNA文庫，RT-PCR，Northern雜交、基因芯片等奠定基礎(chǔ)。有關(guān)植物RNA的提取方法已有不少報(bào)道［1］，但由于植物組織具有多樣性，在實(shí)際應(yīng)用中需要摸索出適應(yīng)自身研究的植物材料的RNA提取方法?！ ”緦?shí)驗(yàn)通過對比高鹽溶液法、LiCl沉淀法等4種常用的植物RNA提取方法，對甘草不同組織的RNA進(jìn)行分離研究，從而找到高效、簡便、適用于甘草不同組織的RNA提取方法。 1材料與方法 1.1材料一年生甘草的葉片和根部組織。用0.1%生理鹽水洗凈，用干凈吸水紙擦
6、干，分成1g/份存于離心管中，于液氮中迅速凍存，然后轉(zhuǎn)入-70℃冰箱保存?！ ?.2方法 1.2.1高鹽溶液法分別取葉片和根組織各1g，放入研缽中，加入液氮研磨成細(xì)粉，加入10ml的抽提緩沖液（100mmol/LTris-HCl(pH9.5)，10mmol/LEDTA(pH8.0)，4mol/L異硫氰酸胍，5%的β-巰基乙醇，2%PVP），靜置，待抽提緩沖液緩慢融化，用力研磨，直至分散混勻，分裝在4個10ml離心管中。12000g離心5min，取上清液，加入1ml氯仿，混勻，12000g離心10min。取
7、上清液，加入等體積的異丙醇和等體積的高鹽溶液（1.2mol/LNaCl，0.8mol/L檸檬酸三鈉），靜置10min12000g離心30min，棄去上清，沉淀用75%乙醇洗滌，自然干燥，用50μl無RNase水溶解，-70℃保存?！ ?.2.2LiCl沉淀法分別取葉片和根組織各1g，放入研缽中，加入液氮研磨成細(xì)粉，轉(zhuǎn)入4個10ml的離心管，分別加入3ml抽提緩沖液（0.75mol/L檸檬酸鈉溶液(pH7.0)，10%(m/V)N-月桂肌氨酸鈉溶液，100mmol/LTris-HCl(pH9.5)，10mmo
8、l/LEDTA(pH8.0)，4mol/L異硫氰酸胍，5%β-巰基乙醇，2%PVP），混勻，冰浴30min，23000g離心20min。吸取上清液，依次加入0.4ml2mol/LNaCl，4ml苯酚，0.8ml氯仿:異戊醇(49:1)，混勻，冰浴15min，23000g離心20min。取上清液，加入等量的KAc溶液，冰浴30min，23000g離心20min。吸取上清液，加入0.6倍體積的異丙醇，-20℃放置45
