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《中晚期肝癌患者外周血淋巴細胞亞群的研究》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、中晚期肝癌患者外周血淋巴細胞亞群的研究廖媛陳亞瓊中山大學(xué)附屬第三醫(yī)院檢驗科，廣東廣州510630[摘要]目的探討中晚期肝癌患者外周血淋巴細胞亞群的變化及意義。方法采用流式細胞術(shù)檢測69例中晚期肝癌患者外周血淋巴細胞亞群的比例，包括CD4+T細胞（Th1、Th17和Treg）、CD8+T細胞、NK細胞和NKT細胞，并以20例健康人和28例早期肝癌患者作為對照。結(jié)果與健康人相比，中晚期肝癌患者外周血Th1、Th17以及Treg比例均顯著升高（P<0.05）；與早期肝癌患者相比，中晚期肝癌患者外周血Th17細胞比例
2、也明顯升高(P=0.016)，而Tc1細胞比例卻顯著下降(P=0.003)。結(jié)論隨著腫瘤進展，中晚期肝癌患者外周血淋巴細胞亞群的平衡出現(xiàn)紊亂，提示腫瘤可能通過多種機制影響機體的免疫功能，進而幫助腫瘤進展和轉(zhuǎn)移。.jyqka，簡稱肝癌或HCC）占原發(fā)性肝癌的90%以上，其發(fā)病率和死亡率在全球范圍內(nèi)分別位列第6位和第3位[1]。我國是肝癌的高發(fā)區(qū)，發(fā)病人數(shù)約占全球的54%[2]。由于肝癌的自然病程較長、起病隱匿，超過80%的肝癌在就診時已屬于中晚期，無法進行根治性切除手術(shù)，療效欠佳、預(yù)后差[3-4]。機體免疫狀態(tài)對肝癌
3、的療效和預(yù)后有重要影響[5]。正常情況下，機體的免疫監(jiān)控機制可消滅絕大多數(shù)異常的細胞。但極少數(shù)惡性細胞不僅在發(fā)生的過程中獲得了免疫逃逸的能力形成腫瘤，后者更可以在發(fā)展的過程中，通過多種手段來調(diào)控機體的免疫應(yīng)答來幫助自身的進展和轉(zhuǎn)移[6]。淋巴細胞是免疫系統(tǒng)的重要組成成分，在腫瘤發(fā)生發(fā)展中起到重要作用[7]。在腫瘤微環(huán)境中，既存在殺傷型免疫細胞，如NK細胞、CTL細胞等，它們能直接或通過分泌細胞因子殺傷腫瘤細胞，抑制腫瘤生長；也存在某些調(diào)節(jié)性或抑制型免疫細胞，如Treg細胞等，它們非但不能清除腫瘤，反而在腫瘤的發(fā)生發(fā)
4、展過程中抑制其他效應(yīng)細胞的抗腫瘤作用。該文采用流式細胞術(shù)對69例中晚期肝癌患者外周血各淋巴細胞亞群進行對比性研究，旨在探討中晚期肝癌患者細胞免疫功能的變化及意義。報道如下。1材料與方法1.1實驗對象、樣本采集和處理肝癌患者外周血由中山大學(xué)腫瘤防治中心肝膽外科提供。實驗符合赫爾辛基宣言（TheDeclarationofHelsinki）的相關(guān)規(guī)定，所有患者均已簽署知情同意書并得到中山大學(xué)倫理委員會的批準[8]。肝細胞性肝癌的診斷標準依據(jù)EuropeanAssociationfortheStudyoftheLiver（
5、EASL）的標準[9]。臨床腫瘤分期依據(jù)國際抗癌聯(lián)盟制定的TNM分期（第6版）。所有患者治療前未接受任何抗腫瘤治療。20例健康人外周血由廣州市血液中心提供。1.1.1實驗組從2011年6月—2012年5月期間，共收集中晚期（TNMIII期）肝癌患者69例。其中男62例，女7例，年齡26~75歲，中位年齡50歲。1.1.2對照組研究期間同時收集了28例早期（TNMI期）肝癌患者和20例健康人的外周血作為對照。其中早期肝癌患者，男27例，女1例，年齡32~69歲，中位年齡48歲；健康人，男17例，女3例，年齡25~55
6、歲，中位年齡44歲。2個對照組與實驗組性別、年齡差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。1.1.3樣本采集和處理所有入組病例于治療前2~3d抽取清晨空腹外周靜脈血6mL進行分析。肝素抗凝管收集，收集后6h內(nèi)進行處理。1.2主要儀器和試劑1.2.1實驗儀器流式細胞儀為美國BeckmanCoulter公司生產(chǎn)，型號為FC500。1.2.2實驗試劑流式細胞術(shù)熒光抗體：CD3-APC、CD3-ECD、CD4-FITC、CD4-PC7、CD8-PE、IFN-γ-PE購自美國BeckmanCoulter公司；CD3-FITC、
7、CD56-PC7購自美國BD公司；IL-17A-AF647、FoxP3-APC購自美國eBioscience公司。IL-17固定破膜試劑盒（IntraPreReagent）購自美國BeckmanCoulter公司。FoxP3固定破膜試劑盒購自美國eBioscience公司。白細胞活化劑購自美國BD公司。Ficoll淋巴細胞分離液購自天津灝洋公司。1.3淋巴細胞亞群檢測采用Ficoll密度梯度離心法分離外周血單個核細胞。胞內(nèi)抗原IL-17和IFN-γ的檢測用白細胞活化劑刺激細胞4h之后進行染色。取50μL細胞（1×1
8、04/μL），加入適量的表面抗體，4℃避光孵育30min，PBS洗1次，離心（4℃，380g，8min），棄上清。胞內(nèi)抗原染色：加入50μL固定劑，室溫避光孵育15min，PBS洗一次，離心棄上清，加入50μL破膜劑，室溫避光孵育5min，加入適量的胞內(nèi)抗體，4℃避光孵育30min，PBS洗1次，離心棄上清，以500μLPBS重懸細胞，用流式細胞儀FC500
